Name: Chronique Salmonella Modèle de souris infectées (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Découvrez comment établir un modèle chronique d'infection à Salmonella typhimurium chez la souris. Cette méthode permet d'étudier la colonisation intestinale persistante et les interactions hôte-pathogène sur 27 semaines.

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Ce travail a été soutenu par le NIDDK KO1 DK075386 subvention et l&#39;American Cancer Society RSG-09-075-01-MBC à juin dim.

Ce protocole comprend trois parties: la détection de culture bactérienne, gavage chez la souris, et la salmonelle. 1. Condition de la croissance de Salmonella. <ol><li> Préparer la Salmonella bouillon Luria-Bertani (LB) plaque, incuber à 37 ° C pendant la nuit. </li><li> Choisissez un clone de la plaque de LB et mis en 7 LB ml dans un tube de 12 ml et agiter à 37 ° C pendant environ 5 heures. </li><li> Inoculer 50 ml LB avec 0,05 ml d'une culture en phase stationnaire et incuber à 37 ° C sans agitation pendant environ 18 heures. </li><li> Spin nuit culture bactérienne à la température ambiante à 6000 rpm pendant 10 minutes, de suspendre les bactéries dans HBSS utilisant 100:3 ratio (LB: HBSS). Par exemple: Chaque culture LB 50 ml sera suspendu dans 1,5 ml de HBSS. </li><li> Pour le gavage des animaux, diluer la culture bactérienne au ratio de 01:10. Par exemple: Chaque culture de 1,5 ml LB sera suspendu dans 15 ml de HBSS. </li></ol> 2. Salmonella-infection modèle *. <ol><li> Préparer la solution de streptomycine. Chaque souris sera donné 7,5 mg de streptomycine dans 100 ul de HBSS. Par exemple, préparer au total 90 mg de streptomycine dans 1,2 ml de HBSS pour les 10 souris. Toujours avoir un peu de volume supplémentaire lors de la préparation de la solution de streptomycine. </li><li> Retirer de l'eau et de nourriture 4 heures avant le traitement par gavage oral. </li><li> Gavage des souris avec de la streptomycine avec 7,5 mg de streptomycine (100 pi de HBSS pour les souris témoins). Prenez la peau sur l'épaule de la souris fermement avec le pouce et le majeur, étirer la tête et du cou avec l'index pour faire l'œsophage droite. Diriger la balle à pointe de l'aiguille d'alimentation sur le toit de la bouche et vers le côté droit du dos du pharynx, puis doucement descendre dans l'œsophage et injecter la solution 100 ul. Aucune résistance devrait se faire sentir. </li><li> À 20 heures après le traitement à la streptomycine, l'eau prélevée et de la nourriture à nouveau avant que les souris sont infectées par des bactéries. </li><li> Gavage chaque souris avec 100 ul de suspension dans HBSS ou traitées avec du HBSS stérile (contrôle) par gavage oral. La procédure de gavage est le même que 2,3) gavage des souris avec de la streptomycine. </li></ol> Les expérimentations animales ont été réalisées par * à l'aide pathogènes spécifiques sans C57BL / 6 femelles souris (Taconic, Hudson, NY), qui étaient vieilles de 6-7 semaines, comme décrit précédemment 1. Le protocole a été approuvé par l'Université de Rochester University Comité des Ressources Animales (UCAR). 3. Détection des salmonelles dans l'intestin. <ol><li> Recueillir la souris fécales (environ 100 mg). </li><li> Transférer l'échantillon fécal à un tube de 1,5 centrifugeuse micro avec 1ml de PBS et vortexer vigoureusement. </li><li> Centrifuger pendant 10 min à 800 rpm. Transférer le surnageant dans un tube de centrifugeuse propre. </li><li> Centrifugation à 6000 rpm pendant 5 min. Surnageant est jeté et 200 ul de PBS est ajouté aux pastilles et vortexés. </li><li> Streak le PBS 200 pi avec un épandeur portable jetable sur une plaque BBL CHROMagar pour détecter la bactérie Salmonella. Salmonella apparaissent mauves (rose au violet, voir Fig.1). Si 200 ul rendements trop nombreuses colonies sur la plaque, utiliser 100 ul ou 50 ul de la série. </li></ol> 4. Des résultats représentatifs. Lorsque le protocole est fait correctement, Salmonella typhimurium colonisation ne peut être détecté dans l'intestin de la souris sur 6 mois. Salmonella pourrait être détectée par la culture fécale plus de 6 mois (Fig.1). Comme une des caractéristiques viennent de ce modèle, le corps la perte de poids et les décès surviennent dans les 4 semaines après l'infection. Dépendant du souches de Salmonella utilisés pour l'infection, certaines souris peuvent pas survivre plus de 6 mois. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Salmonella intestinales chez les espèces de Salmonella apparaissent mauves (rose au violet) en couleur, en raison de différences métaboliques, en présence de chromogènes sélectionné. D'autres bactéries sont soit inhibé ou produire des colonies bleu-vert ou incolore. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Proportions de survie de souris infectées par la bactérie souche mutante PhoP c, c PhoP Avra-et PhoP c AvrA-/AvrA +, c PhoP Avra pendant 4 semaines (28 jours). Le poids corporel Tableau 1. De souris infectées par des salmonelles pendant 4 semaines. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1 semaine </td><td> 2 semaines </td><td> 3 semaines </td><td> 4 semaines </td></tr><tr><td> le contrôle </td><td> 16,78 ± 1,05 </td><td> 16,91 ± 1,28 </td><td> 18,26 ± 1,23 </td><td> 19,31 ± 1,26 </td><td> 20,26 ± 1,15 </td></tr><tr><td> PhoP c </td> 16,89 ± 1,03 <td> 17,14 ± 1,19 </td><td> 17,43 ± 1,63 * </td><td> 18,68 ± 1,78 </td><td> 20,05 ± 1,11 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> 16,91 ± 1,12 </td><td> 16,96 ± 1,39 </td><td> 17,06 ± 2,14 ** </td><td> 18,71 ± 2,18 </td><td> 20,15 ± 1,56 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> 16,94 ± 0,96 </td><td> 17,17 ± 1,02 </td><td> 17,63 ± 1,42 * </td><td> 18,44 ± 2,03 </td><td> 20,09 ± 1,17 </td></tr></tbody></table> * Par rapport au groupe contrôle p &lt;0,05 ** Par rapport au groupe témoin p &lt;0,01 Tableau 2. Souches de Salmonella utilisé dans cette étude. <table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Descriptif </td><td> Référence ou source </td></tr><tr><td> Salmonella 14028s </td><td> Wild-type S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP c </td><td> Non-pathogènes régulateur complexe mutant </td><td> Miller et al., 1990 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> Avra-mutation </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP c Avra-avec Avra encodage complété plasmidique </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
<li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions%3A+Host+resistance+factor+Nramp1+up-regulates+the+expression+of+Salmonella+pathogenicity+island-2+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions: Host resistance factor Nramp1 up-regulates the expression of Salmonella pathogenicity island-2 virulence genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 15705-15710 (2002).</li>
<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+for+infectious+disease+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints for infectious disease animal models.</a> ILAR J. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Ye, Z., Petrof, E. O., Boone, D., Claud, E. C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+effector+AvrA+regulation+of+colonic+epithelial+cell+inflammation+by+deubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Salmonella effector AvrA regulation of colonic epithelial cell inflammation by deubiquitination.</a> Am J Pathol. 171 (3), 882-892 (2007).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K. S., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+enteric+salmonella+infection+in+mice+leads+to+severe+and+persiste+nt+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic enteric salmonella infection in mice leads to severe and persiste nt intestinal fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Sukupolvi, S., Edelstein, A., Rhen, M., Normark, S. J., Pfeifer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li>
<li>Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. (2007).</li>
<li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

Pour utiliser ce système, il est nécessaire pour le chercheur d&#39;apprendre à gavage des animaux. Nous détaillons une méthode pour préparer une culture bactérienne et gavage des souris. Nous montrons aussi comment contrôler la persistance de Salmonella dans le tractus gastro-intestinal (GI). Les étapes essentielles de ce protocole, y compris: <ol><li> Streptomycine prétraitement: streptomycine prétraitement pourrait se débarrasser de certains flore intestinale commensale et de faire des souris sensibles à...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>Bouillon Luria-Bertani</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille d'alimentation</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycine </td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>Épandeurs cellulaires jetables</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

chronique salmonella modèle de souris infectées

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

Le modèle de souris infectées par des bactéries est un système puissant modèle pour étudier des domaines tels que l&#39;infection, l&#39;inflammation, l&#39;immunologie, la transduction du signal, et la tumorigenèse. De nombreux chercheurs ont tiré parti de la colite induite par<em&gt; Salmonella</emTyphimurium&gt; pour les études sur la phase précoce de l&#39;inflammation et l&#39;infection. Cependant, seuls quelques rapports sont sur l&#39;infection chronique<em&gt; In vivo</em&gt;. Souris avec<em&gt; Salmonella</emL&#39;existence&gt; persistante dans le tractus gastro-intestinal nous permettent d&#39;explorer la relation hôte-bactérienne à long terme d&#39;interaction, la transduction du signal, et la tumorigenèse. Nous avons établi un modèle de chroniques bactériennes de souris infectées par<em&gt; Salmonella</emLa colonisation typhimurium&gt; dans l&#39;intestin de la souris sur 6 mois. Pour utiliser ce système, il est nécessaire pour le chercheur d&#39;apprendre à préparer la culture bactérienne et gavage des animaux. Nous détaillons une méthode pour préparer des cultures bactériennes et des souris par gavage. Nous montrons aussi comment détecter la<em&gt; Salmonella</emLa persistance&gt; dans le tractus gastro-intestinal. Globalement, ce protocole aidera les chercheurs utilisant le modèle de souris infectées par des bactéries pour traiter des questions d&#39;importance fondamentale biologiques et microbiologiques.

Établir un modèle de chroniques bactériennes de souris infectées par la persistance<em&gt; Salmonella</emLa colonisation typhimurium&gt; dans l&#39;intestin pendant 27 semaines.

Chronique Salmonella Modèle de souris infectées

Le modèle murin d'infection bactérienne est un système modèle puissant pour étudier des domaines tels que l'infection, l'inflammation, l'immunologie, la transduction du signal et...

L'objectif général de cette procédure est de mettre en place un modèle murin chroniquement infecté par Salmonella. Cela est réalisé en préparant tout d'abord une solution de Salmonella. La deuxième étape de la procédure consiste à administrer par gavage aux souris de la streptomycine, suivie de Salmonella, ou uniquement de la streptomycine.La troisième étape de la procédure consiste à isoler la salmonelle à partir des matières fécales de souris et à détecter l'infection par la salmonelle dans l'intestin de la souris à l'aide de plaques chromogéniques BL. La dernière étape de la procédure consiste à observer et enregistrer la masse corporelle des souris et à noter les changements de vitalité après l'infection par la salmonelle. En définitive, des résultats peuvent être obtenus qui montrent qu'une infection par la salmonelle peut être établie dans l'intestin de souris ayant reçu une gavage de salmonelle.Bonjour, je suis Michelle P du laboratoire du Dr Johnson du Département de médecine de l'Université de Rochester. Je fais également partie du Laboratoire Sun et je suis Y du Laboratoire Sun. Aujourd'hui, nous allons vous montrer une procédure permettant d'établir un modèle de masse infectée par Alytic Lennar.Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour étudier la transduction des signaux lors de l'interaction hôte-bactérie et la genèse tumorale. Commençons donc. Avant l'expérimentation, préparez suffisamment de boîtes de gélose luria, berti ou LB pour chaque souche de salmonelle et pour l'ensemble de l'expérience.Les plaques peuvent être réfrigérées et conservées pendant plusieurs mois. Ensuite, préparez une culture de salmonelle. Retirez un flacon de stock de salmonelle congelé à moins 80 degrés Celsius et laissez-le décongeler sur le plan de travail pour ensemencer la flamme de salmonelle.Stérilisez une anse bactériologique dans la flamme d'un bec Bunsen, puis plongez-la dans la souche bactérienne décongelée. Tracez des lignes en zigzag avec l'anse sur le tiers supérieur de la boîte de gélose LB. Repassez l'anse à la flamme, puis tournez la boîte. Effectuez un mouvement en zigzag avec la boucle pour croiser les stries précédentes et répartir les bactéries sur le deuxième tiers de la boîte. Répétez une fois de plus. Repassez la boucle à la flamme.Ne laissez pas le porte-anneau pénétrer dans l'agar. Laissez les colonies se développer en conservant les boîtes dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant la nuit. Si l'opération est correctement réalisée, la boîte contenant la salmonelle devrait présenter des colonies individuelles dans au moins une section.Le lendemain, prélever un clone à partir de la boîte de Pétri LB à l’aide d’un cure-dent stérile ou d’un anneau de prélèvement bactérien, puis l’insérer dans 7 mL de bouillon LB contenu dans un tube de 12 mL. Agiter le tube à 37 degrés Celsius pendant environ cinq heures.Utilisez 0,05 millilitres de cette culture pour l'inoculation. Ajoutez 50 millilitres de LB dans un tube Falcon. Incubez à 37 degrés Celsius sans agitation pendant environ 18 heures.Faire centrifuger la culture bactérienne de 50 millilitres incubée toute la nuit à température ambiante à 5 000 tr/min pendant 10 minutes et jeter le surnageant. Ensuite, ajouter 1,5 millilitre de solution saline tamponnée au Hank ou HBSS dans le tube pour resuspendre les bactéries, soit un rapport de 100 parties de LB pour 3 parties de HBSS. Puis porter le volume total à 15 millilitres avec du HBSS, ou un rapport de 1 à 10 de LB par rapport au HBSS.Chaque souris nécessite 100 microlitres de culture diluée de salmonelle, soit entre 1 × 10⁶ et 1 × 10⁸ unités formant colonies, avant de commencer le jeûne en eau et en nourriture quatre heures avant l'expérimentation. Préparez ensuite une solution de streptomycine juste avant la gavage en diluant 7,5 milligrammes de streptomycine en poudre dans 100 microlitres de HBSS. Pour chaque souris injectée, prévoyez un volume supplémentaire afin de compenser les pertes avant la gavage chez la souris.Préparez d'abord une canule d'alimentation contenant 100 microlitres de solution de streptomycine. Retirez la première souris de la cage afin de lui administrer une gavage et maintenez la souris tournée vers le plan de travail. Saisissez fermement la peau située au-dessus de l'épaule de la souris entre le pouce et le majeur, puis étirez la tête et le cou à l'aide de l'index afin de redresser l'œsophage.Diriger l'extrémité arrondie de l'aiguille d'alimentation le long du palais et vers le côté droit de la partie postérieure du pharynx. Ensuite, l'introduire doucement dans l'œsophage et injecter les 100 microlitres de solution de streptomycine. Aucune résistance ne doit être ressentie.Répétez ce processus pour toutes les souris expérimentales et témoins soumises à l'expérimentation. Environ 20 heures après le strp de m et la gavage, et quatre heures avant la gavage de salmonella, retirez l'eau et la nourriture des souris qui recevront la gavage de salmonella par voie orale. Effectuez la gavage de chaque souris de la même manière qu'auparavant, en utilisant 100 microlitres de solution de salmonella dans du HBSS.Après la gavage, transférer chaque souris dans une nouvelle cage pour commencer la collecte des selles. Environ huit heures après le gavage, retirer les matières fécales de la cage immédiatement après leur expulsion. Prélever 100 milligrammes de matière fécale de souris comme échantillon expérimental.Prélèvez des échantillons quotidiennement ou hebdomadairement, selon la durée de l'étude, pour l'analyse de Salmonella dans les matières fécales. Transférez l'échantillon fécal dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre contenant un millilitre de PBS et vortexez vigoureusement, puis centrifugez pendant 10 minutes à 800 tr/min. Transférez le surnageant dans un tube de 1,5 millilitre propre et centrifugez à 6 000 tr/min pendant cinq minutes.Jetez le surnageant et ajoutez 200 microlitres de PBS aux culots ; vortexez pour resuspendre. Ensuite, détectez la salmonelle à l’aide d’une plaque BB l roag. Utilisez de 10 à 100 microlitres de solution de matière fécale par plaque, en étalant sur la plaque comme indiqué dans la section deux.Les esp&egrave;ces de salmonelles apparaissent en couleur rose en raison de diff&eacute;rences m&eacute;taboliques en pr&eacute;sence de chromog&egrave;nes s&eacute;lectionn&eacute;s. Comptez les colonies de salmonelles sur la bo&icirc;te de Petri afin de comparer le niveau d'infection entre des souris individuelles. Dans cette proc&eacute;dure exp&eacute;rimentale, nous avons utilis&eacute; des souris femelles C57BL/6 sans agents pathog&egrave;nes sp&eacute;cifiques &acirc;g&eacute;es de six &agrave; sept semaines.Les souris ont été infectées par Salmonella et de la streptomycine associée à HBSS. Les souris ont reçu par gavage contrôlé uniquement de la streptomycine. Les souches de Salmonella utilisées comprennent la souche sauvage de Salmonella typhimurium, ATCC 1 4 0 2 8 S FPC, une souche mutante non pathogène de Salmonella, ainsi que trois souches FPC du laboratoire du Dr James Madera portant le gène de virulence associé AAV R age sur le plasmide de faible copie PSKW 29. À l’aide de ce protocole, la colonisation par Salmonella typhimurium peut être détectée dans l’intestin de la souris.L'infection chronique par Salmonella a été mesurée par analyse des matières fécales et des échantillons de tissu intestinal, et des prélèvements de poids corporel ont été recueillis pour une coloration immunofluorescente. Généralement, une perte de poids corporel et la mort surviennent dans les quatre semaines suivant l'infection. Les proportions de survie quatre semaines après l'infection sont indiquées ici.Une fois que les souris survivent quatre semaines après l'infection, elles reprennent du poids corporel et la fréquence des décès diminue au cours des 23 semaines restantes. Dans l'ensemble, plus de 65 % des souris infectées par des souches de Salmonella, FSY fsy, A VRA nulle ou fsy. A VRA hétérozygote peuvent survivre plus de six mois avec une infection persistante de Salmonella dans l'intestin.Après l'infection aiguë, les survivants continuaient à porter des salmonelles, qui pouvaient être détectées six mois après l'infection à l'aide de la méthode décrite dans ce protocole. L'analyse en immunofluorescence d'échantillons tissulaires provenant de l'intestin de souris montre l'invasion des salmonelles dans la muqueuse intestinale à 27 semaines post-infection. Sur cette image, les noyaux sont colorés en bleu et les cellules infectées par les salmonelles apparaissent en vert.Comme le montre le groupe témoin, il n'y a pas de coloration verte vif, ce qui indique une absence de colonisation par la salmonelle. En revanche, chez les souris infectées par la salmonelle à 27 semaines post-infection, on observe une coloration verte vif dans la muqueuse intestinale. Cela démontre la persistance de l'infection à salmonelle chez la souris prétraitée à la streptomycine.Nous venons de vous montrer comment induire une infection chronique chez la souris. Lorsque vous réalisez cette procédure, il est important de vous souvenir de préparer une culture fraîche pour le garage, de maîtriser correctement les techniques de garage et de détecter la présence d'anticorps antinucléaires (ANA) afin de vous assurer que votre modèle expérimental fonctionne. Voilà tout.Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

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Un modèle de souris contrôlée pour infection polymicrobienne néonatale

Ce protocole décrit un modèle de souris de la fibrose intestinale salmonella conduite qui ressemble aux caractéristiques pathologiques clés de Crohn' la maladie de s comprenant l'inflammation transmurale et la fibrose. Cette méthode peut être utilisée pour évaluer les facteurs hôtes qui modifient les résultats fibrotiques à l'aide de souris mutantes maintenues sur un fond génétique C57Bl/6.

Fibrose intestinale induite par l'infection chronique à Salmonella

Ce protocole décrit l’induction d’une septicémie monobactérienne à Gram négatif dans un système modèle murin. Le modèle est utile pour étudier les réponses inflammatoires et létales de l’hôte pendant la septicémie.

Caractérisation de la péritonite septique induite par Salmonella Typhimurium chez la souris

Cet article décrit un nouveau modèle murin pour la transition du pneumocoque d’un colonisateur asymptomatique à un agent pathogène pathogène au cours d’une infection virale. Ce modèle peut être facilement adapté pour étudier les interactions polymicrobiennes et hôte-pathogène au cours des différentes phases de la progression de la maladie et entre divers hôtes.

Un modèle murin pour la transition de Streptococcus pneumoniae de colonisateur à pathogène lors d’une co-infection virale récapitule la maladie exacerbée par l’âge

Découvrez comment établir un modèle chronique d'infection à Salmonella typhimurium chez la souris. Cette méthode permet d'étudier la colonisation intestinale persistante et les interactions hôte-pathogène sur 27 semaines.

Chronique Salmonella Modèle de souris infectées

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