Name: Sélection daptamères pour amyloïde β-protéine, lagent causal de la maladie dAlzheimer (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 23 s
Description: Découvrez la sélection d'aptamères ARN ciblant la protéine bêta-amyloïde impliquée dans la maladie d'Alzheimer. Cette méthode in vitro utilise transcription, liaison sur filtre et amplification pour isoler des molécules spécifiques.

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Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH AG030709 / NIA et 07-65798 du California Department of Public Health. Nous reconnaissons Margaret M. Condron pour la synthèse peptidique et de l&#39;analyse des acides aminés, le Dr Elizabeth F. Neufeld pour les aider et de soutenir les premières étapes du projet, le Dr Chi-Hong Chen B. de fournir un soutien et des réactifs, et le Dr Andrew D . Ellington pour les discussions utiles.

<ol><li>Monien, B. H., Apostolova, L. G., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+diagnostics+and+therapeutics+for+Alzheimer%27s+disease-how+early+can+we+get+there%5BTitle%5D)+AND+%22Expert.+Rev.+Neurother%22%5BJournal%5D)">Early diagnostics and therapeutics for Alzheimer's disease-how early can we get there.</a> Expert. Rev. Neurother. 6, 1293-1306 (2006).</li>
<li>Nestor, P. J., Scheltens, P., Hodges, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+early+detection+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in the early detection of Alzheimer's disease.</a> Nat. Med. 10, S34-S41 (2004).</li>
<li>Kawas, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Early+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Early Alzheimer's disease.</a> N. Engl. J. Med. 349, 1056-1063 (2003).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+%CE%B2-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid β-peptide.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 8, 101-112 (2007).</li>
<li>Kirkitadze, M. D., Bitan, G., Teplow, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradigm+shifts+in+Alzheimer%27s+disease+and+other+neurodegenerative+disorders%3A+the+emerging+role+of+oligomeric+assemblies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Paradigm shifts in Alzheimer's disease and other neurodegenerative disorders: the emerging role of oligomeric assemblies.</a> J. Neurosci. Res. 69, 567-577 (2002).</li>
<li>Rahimi, F., Shanmugam, A., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-function+relationships+of+pre-fibrillar+protein+assemblies+in+Alzheimer%27s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Alzheimer+Res%22%5BJournal%5D)">Structure-function relationships of pre-fibrillar protein assemblies in Alzheimer's disease and related disorders.</a> Curr. Alzheimer Res. 5, 319-341 (2008).</li>
<li>Jayasena, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamers%3A+an+emerging+class+of+molecules+that+rival+antibodies+in+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Aptamers: an emerging class of molecules that rival antibodies in diagnostics.</a> Clin. Chem. 45, 1628-1650 (1999).</li>
<li>Bunka, D. H., Stockley, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamers+come+of+age+-+at+last%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Aptamers come of age - at last.</a> Nat. Rev. Microbiol. 4, 588-596 (2006).</li>
<li>Ellington, A. D., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+selection+of+RNA+molecules+that+bind+specific+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.</a> Nature. 346, 818-822 (1990).</li>
<li>Tuerk, C., Gold, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+evolution+of+ligands+by+exponential+enrichment%3A+RNA+ligands+to+bacteriophage+T4+DNA+polymerase%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase.</a> Science. 249, 505-510 (1990).</li>
<li>Lee, J. F., Stovall, G. M., Ellington, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamer+therapeutics+advance%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Aptamer therapeutics advance.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 10, 282-289 (2006).</li>
<li>Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+aptamers+specifically+interact+with+the+prion+protein+PrP%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">RNA aptamers specifically interact with the prion protein PrP.</a> J. Virol. 71, 8790-8797 (1997).</li>
<li>Bibby, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+a+novel+in+vitro+selection+technique+to+isolate+and+characterise+high+affinity+DNA+aptamers+binding+mammalian+prion+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Application of a novel in vitro selection technique to isolate and characterise high affinity DNA aptamers binding mammalian prion proteins.</a> J. Virol. Methods. 151, 107-115 (2008).</li>
<li>Rhie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+2%27-fluoro-RNA+aptamers+that+bind+preferentially+to+disease-associated+conformations+of+prion+protein+and+inhibit+conversion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Characterization of 2'-fluoro-RNA aptamers that bind preferentially to disease-associated conformations of prion protein and inhibit conversion.</a> J. Biol. Chem. 278, 39697-39705 (2003).</li>
<li>King, D. J., Safar, J. G., Legname, G., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioaptamer+interactions+with+prion+proteins%3A+sequence-specific+and+non-specific+binding+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Thioaptamer interactions with prion proteins: sequence-specific and non-specific binding sites.</a> J. Mol. Biol. 369, 1001-1014 (2007).</li>
<li>Proske, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-protein-specific+aptamer+reduces+PrPSc+formation%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Prion-protein-specific aptamer reduces PrPSc formation.</a> ChemBioChem. 3, 717-725 (2002).</li>
<li>Murakami, K., Nishikawa, F., Noda, K., Yokoyama, T., Nishikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-bovine+prion+protein+RNA+aptamer+containing+tandem+GGA+repeat+interacts+both+with+recombinant+bovine+prion+protein+and+its+%CE%B2+isoform+with+high+affinity%5BTitle%5D)+AND+%22Prion%22%5BJournal%5D)">Anti-bovine prion protein RNA aptamer containing tandem GGA repeat interacts both with recombinant bovine prion protein and its β isoform with high affinity.</a> Prion. 2, 73-80 (2008).</li>
<li>Luhrs, T., Zahn, R., Wuthrich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+formation+by+recombinant+full-length+prion+proteins+in+phospholipid+bicelle+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Amyloid formation by recombinant full-length prion proteins in phospholipid bicelle solutions.</a> J. Mol. Biol. 357, 833-841 (2006).</li>
<li>Bunka, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+characterization+of+RNA+aptamers+specific+for+amyloid+fibril+epitopes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Production and characterization of RNA aptamers specific for amyloid fibril epitopes.</a> J. Biol. Chem. 282, 34500-34509 (2007).</li>
<li>Ylera, F., Lurz, R., Erdmann, V. A., Furste, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+RNA+aptamers+to+the+Alzheimer%27s+disease+amyloid+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Selection of RNA aptamers to the Alzheimer's disease amyloid peptide.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 290, 1583-1588 (2002).</li>
<li>Rahimi, F., Murakami, K., Summers, J. L., Chen, C. H., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+aptamers+generated+against+oligomeric+A%CE%B240+recognize+common+amyloid+aptatopes+with+low+specificity+but+high+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">RNA aptamers generated against oligomeric Aβ40 recognize common amyloid aptatopes with low specificity but high sensitivity.</a> PLoS ONE. 4, e7694-e7694 (2009).</li>
<li>Bitan, G., Lomakin, A., Teplow, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+%CE%B2-protein+oligomerization%3A+prenucleation+interactions+revealed+by+photo-induced+cross-linking+of+unmodified+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Amyloid β-protein oligomerization: prenucleation interactions revealed by photo-induced cross-linking of unmodified proteins.</a> J. Biol. Chem. 276, 35176-35184 (2001).</li>
<li>Rahimi, F., Maiti, P., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photo-induced+cross-linking+of+unmodified+proteins+%28PICUP%29+applied+to+amyloidogenic+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Photo-induced cross-linking of unmodified proteins (PICUP) applied to amyloidogenic peptides.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li>
<li>Bitan, G., Fradinger, E. A., Spring, S. M., Teplow, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxic+protein+oligomers-what+you+see+is+not+always+what+you+get%5BTitle%5D)+AND+%22Amyloid%22%5BJournal%5D)">Neurotoxic protein oligomers-what you see is not always what you get.</a> Amyloid. 12, 88-95 (2005).</li>
<li>Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+study+of+metastable+amyloidogenic+protein+oligomers+by+photo-induced+cross-linking+of+unmodified+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Structural study of metastable amyloidogenic protein oligomers by photo-induced cross-linking of unmodified proteins.</a> Methods Enzymol. 413, 217-236 (2006).</li>
<li>Chen, C. H., Chernis, G. A., Hoang, V. Q., Landgraf, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+heregulin+signaling+by+an+aptamer+that+preferentially+binds+to+the+oligomeric+form+of+human+epidermal+growth+factor+receptor-3%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Inhibition of heregulin signaling by an aptamer that preferentially binds to the oligomeric form of human epidermal growth factor receptor-3.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100, 9226-9231 (2003).</li>
<li>Adams, D. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAdams%2C+DS+%22Lab+math%3A+a+handbook+of+measurements%2C+calculations%2C+and+other+quantitative+skills+for+use+at+the+bench%22">Lab math: a handbook of measurements, calculations, and other quantitative skills for use at the bench</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2003).</li>
<li>Gopinath, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+developed+for+SELEX%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Methods developed for SELEX.</a> Anal. Bioanal. Chem. 387, 171-182 (2007).</li>
<li>Takahashi, T., Tada, K., Mihara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+aptamers+selected+against+amyloid+%CE%B2-peptide+%28A%CE%B2%29+inhibit+the+aggregation+of+A%CE%B2%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biosyst%22%5BJournal%5D)">RNA aptamers selected against amyloid β-peptide (Aβ) inhibit the aggregation of Aβ.</a> Mol. Biosyst. 5, 986-991 (2009).</li>
</ol>

Le point de départ du processus SELEX est la synthèse d&#39;une bibliothèque d&#39;oligonucléotides aléatoires contenant typiquement 10 12 -10 15 séquences. Dans l&#39;ADN SELEX, cette bibliothèque est utilisée directement après une piscine ADNss est généré, alors que dans l&#39;ARN SELEX, démontré ici, la bibliothèque ADNss est convertie d&#39;abord à un pool d&#39;ARN enzymatiquement par transcription in vitro. Puis, SELEX est réalisé itérativement lequel chaque cycle comprend l...

<table><tbody><tr><td>A&amp;#946;40</td><td>Laboratoire des biopolymères de l'UCLA</td><td></td><td>Poudre lyophilisée</td></tr><tr><td>MX5 Automated-S Microbalance</td><td>Mettler Toledo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubes de 1,6 ml revêtus de silicium</td><td>Denville Scientific</td><td>C19033 ou C19035</td><td></td></tr><tr><td>1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP)</td><td>TCI America</td><td>H0424</td><td>Utiliser sous une hotte chimique.</td></tr><tr><td>Persulfate d'ammonium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-7460</td><td>Agiter vigoureusement jusqu'à ce que la solution devienne limpide. Le APS est préparé frais à chaque utilisation et doit être utilisé dans les 48 heures.</td></tr><tr><td>Tris(2,2-bipyridyl)dichlororuthénium(II) hexahydraté</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>224758-1G</td><td>Agiter vigoureusement jusqu'à ce que la solution devienne limpide. Recouvrir le tube de RuBpy d'une feuille d'aluminium pour protéger le réactif de la lumière ambiante. Le RuBpy est préparé frais à chaque utilisation et doit être employé dans les 48 heures.</td></tr><tr><td>Dithiothréitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43815</td><td></td></tr><tr><td>D-Salt&amp;#8482; Excellulose&amp;#8482; colonnes de désalinisation</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>20449</td><td></td></tr><tr><td>acétate d'ammonium</td><td>Fisher Scientific</td><td>A637-500</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de 0,6 ml revêtus de silicium</td><td>Denville Scientific</td><td>C19063</td><td></td></tr><tr><td>Gels Novex Tricine (10&amp;#8211;20%)</td><td>Invitrogen</td><td>EC6625B0X</td><td>10 puits ; format mini (8 cm x 8 cm) ; 25 &amp;#x03BC;l volume de chargement par puits ; plage de séparation de 5 kDa à 40 kDa</td></tr><tr><td>Cuvette en quartz</td><td>Hellma</td><td>105.250-QS</td><td></td></tr><tr><td>Beckman DU 640 spectrophotomètre</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>bibliothèque d'ADN simple brin</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>Sur commande personnalisée</td><td>La bibliothèque a été conçue pour contenir 49 nucléotides aléatoires encadrés par deux régions constantes comprenant des sites de liaison des amorces et de clonage : 5&amp;rsquo;-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGA ATT CCG CGT GTG C (N : 25 : 25 : 25 : 25 %) (N)&lt;sub&gt;49&lt;/sub&gt; G TCC GTT CGG GAT CCT C-3&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>Taq polymérase ADN</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>71160</td><td>Recombinant &lt;em&gt;Thermus aquaticus&lt;/em&gt; ADN polymérase fournie avec 10&amp;#215; Tampon PCR et un tube séparé de MgCl₂ 25 mM&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; pour la PCR courante.</td></tr><tr><td>PCR Nucleotide Mix, solution 10 mM</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>77212</td><td>(10 mM chacun de dATP, dCTP, dGTP, dTTP)</td></tr><tr><td>Amorce avant</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>Sur commande personnalisée</td><td>5&amp;rsquo;-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGA ATT CCG CGT GTG C-3&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>Amorce reverse</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>Sur commande</td><td>5&amp;rsquo;-GAG GAT CCC GAA CGG AC-3&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>Thermostat de PCR</td><td>Denville Scientific</td><td>Techne TC-312</td><td></td></tr><tr><td>Kit de purification QIAquick PCR (50)</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Denville Scientific</td><td>CA3510-8</td><td></td></tr><tr><td>Tubes coniques stériles de 1,6 ml avec bouchons munis de joints toriques</td><td>Denville Scientific</td><td>C19040-S</td><td></td></tr><tr><td>RiboMAX&amp;#8482; Système de production d'ARN à grande échelle&amp;#8211;T7</td><td>Promega Corp.</td><td>P1300</td><td>Le kit contient : 120 &amp;#x03BC;l'enzyme mix (ARN polymérase, RNasin recombinante)&amp;#174; inhibiteur de ribonucléase et pyrophosphatase inorganique recombinante) ; 240 &amp;#x03BC;tampon de transcription 5 ; 100 &amp;#x03BC;l chacun des 4 rNTPs, 100 mM ; 110 U de DNase RQ1 sans RNase, 1 U/&amp;#x03BC;l; 10 &amp;#x03BC;ADN témoin linéaire, 1 mg/ml ; 1 ml d'acétate de sodium 3 M (pH 5,2) ; 1,25 ml d'eau sans nucléase</td></tr><tr><td>&amp;alpha;-&lt;sup&gt;32&lt;/sup&gt;P-cytidine 5&amp;rsquo;-triphosphate, 250 &amp;mu;Ci (9,25 MBq) </td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>BLU008H250UC</td><td>Activité spécifique : 3000 Ci (111 TBq)/mmol, Tricine 50 mM (pH 7,6)</td></tr><tr><td>Phénol saturé au citrate : chloroforme : alcool isoamylique (125:24:1, pH 4,7)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>77619</td><td></td></tr><tr><td>Chloroforme : alcool isoamylique (24:1)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0549</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol absolu pour biologie moléculaire</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>centrifugeuse microcentrifuge réfrigérée Z216-MK</td><td>Denville Scientific</td><td>C0216-MK</td><td></td></tr><tr><td>illustra ProbeQuant&amp;#8482; Colonnes micro G-50</td><td>GE Healthcare</td><td>Obtenu auprès de Fisher Scientific (45-001-487)</td><td>Préemballé avec du Sephadex&amp;#8482; G-50 de qualité ADN, pré-équilibré dans un tampon STE contenant 0,15 % de Kathon comme biocide</td></tr><tr><td>Compteur de scintillation de table Triathler</td><td>Hidex Oy, Turku, Finlande</td><td>Modèle Triathler LSC : 425-034</td><td></td></tr><tr><td>Novex&amp;#174; Tampon d'échantillonnage TBE-Uréa (2&amp;#215;)</td><td>Invitrogen</td><td>LC6876</td><td></td></tr><tr><td>Gels TBE-Uréa 6 %, 1,0 mm, 10 puits</td><td>Invitrogen</td><td>EC6865BOÎTE</td><td></td></tr><tr><td>Novex&amp;#174; Tampon de migration TBE (5&amp;#215;)</td><td>Invitrogen</td><td>LC6675</td><td></td></tr><tr><td>Désinfectant contre la radioactivité</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-67</td><td></td></tr><tr><td>Embouts de chargement pour gel</td><td>Denville Scientific</td><td>P3080</td><td></td></tr><tr><td>XCell &lt;em&gt;SureLock&lt;/em&gt; Mini-cellule</td><td>Invitrogen</td><td>EI0001</td><td>XCell &lt;em&gt;SureLock&lt;/em&gt; Mini-cellule</td></tr><tr><td>Film d'autoradiographie</td><td>Denville Scientific</td><td>E3018</td><td>Utilisation en totale obscurité</td></tr><tr><td>film d'autoradiographie, Hyperfilm&amp;#8482; ECL</td><td>Amersham</td><td>RPN3114K</td><td>Peut être utilisé sous lumière rouge de sécurité.</td></tr><tr><td>Disques membranaires</td><td>EMD Millipore</td><td>GSWP02500</td><td>Ester mixte de cellulose, hydrophile, 0,22-&amp;#x03BC;membranes de disque m</td></tr><tr><td>Base de support en verre fritté pour flacon de 125 ml</td><td>VWR international</td><td>26316-696</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de Pétri</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-11YZ</td><td></td></tr><tr><td>Urée</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC32738-0050</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>118430010</td><td></td></tr><tr><td>Glycogène</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1767</td><td></td></tr><tr><td>2-propanol pour biologie moléculaire</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9516</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur recombinant de la RNase</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>71571</td><td></td></tr><tr><td>ImProm-II&amp;#8482;Système de transcription inverse</td><td>Promega Corp.</td><td>A3802</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur recombinant de RNase</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>71571</td><td></td></tr><tr><td>RapidRun&amp;#8482; Colorant de charge</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>77524</td><td></td></tr></tbody></table>

sélection d&#39;aptamères pour amyloïde β-protéine, l&#39;agent causal de la maladie d&#39;alzheimer

Selection of Aptamers for Amyloid &beta;-Protein, the Causative Agent of Alzheimer&#39;s Disease

La maladie d&#39;Alzheimer (MA) est une progressive, dépendant de l&#39;âge, maladie neurodégénérative avec une évolution insidieuse qui rend son diagnostic présymptomatique difficiles 1. AD diagnostic définitif est réalisé l&#39;autopsie seulement, établissant ainsi présymptomatique, le diagnostic précoce de la MA est crucial pour développer et administrer des traitements efficaces 2,3. Amyloïde β-protéine (Aß) est au centre de la pathogenèse AD. Soluble, oligomérique assemblées Aßi auraient des effets sur la neurotoxicité dysfonction sous-jacente synaptique et la perte de neurones dans l&#39;AD 4,5. Diverses formes de Aß solubles assemblées ont été décrits, cependant, leurs interrelations et de la pertinence de l&#39;étiologie et la pathogenèse AD sont complexes et mal comprises 6. Des outils spécifiques de reconnaissance moléculaire peut démêler les relations entre les assemblées Aßi et de faciliter la détection et la caractérisation de ces assemblées au début de l&#39;évolution de la maladie avant que les symptômes apparaissent. La reconnaissance moléculaire s&#39;appuie souvent sur des anticorps. Cependant, une autre classe d&#39;outils de reconnaissance moléculaire, des aptamères, offre des avantages importants par rapport aux anticorps 7,8. Les aptamères sont des oligonucléotides générés par la sélection in vitro: l&#39;évolution systématique des ligands par enrichissement exponentiel (SELEX) 9,10. SELEX est un processus itératif qui, semblable à l&#39;évolution darwinienne, permet la sélection, d&#39;amplification, d&#39;enrichissement, et la perpétuation d&#39;une propriété, par exemple, avide, ligand spécifique, contraignant (aptamères) ou de l&#39;activité catalytique (ribozymes et ADNzymes). Malgré l&#39;émergence d&#39;aptamères comme outils de la biotechnologie moderne et la médecine 11, ils ont été sous-utilisés dans le domaine de l&#39;amyloïde. Peu ou ARN aptamères ADNss ont été sélectionnés contre les différentes formes de protéines du prion (PrP) 12-16. Un aptamère ARN générés contre la PrP recombinante bovine a été montré à reconnaître la PrP bovine β-17, une forme soluble, oligomérique, β-feuille riche en variantes de conformation de la PrP pleine longueur qui forme des fibrilles amyloïdes 18. Les aptamères générés en utilisant les formes monomériques et plusieurs de β 2-microglobuline fibrillaire (β 2 m) ont été trouvés pour lier les fibrilles de certaines autres protéines amyloïdogéniques dehors β 2 m 19 fibrilles. Ylera et al. décrit aptamères d&#39;ARN sélectionnés contre immobilisé monomère Aß40 20. De façon inattendue, ces aptamères liés fibrillaire Aß40. Au total, ces données soulèvent plusieurs questions importantes. Pourquoi aptamères sélectionnés contre des protéines monomériques reconnaître leurs formes polymères? Pourriez aptamères contre les formes monomères et / ou oligomères de protéines amyloïdogéniques être obtenus? Pour répondre à ces questions, nous avons tenté de sélectionner des aptamères pour covalente stabilisée oligomères Aß40 21 généré en utilisant la photo-induite de réticulation des protéines non modifiées (PICUP) 22,23. Similaires aux constatations antérieures 17,19,20, ces aptamères ont réagi avec des fibrilles de Aß et de plusieurs autres protéines amyloïdogéniques susceptible de reconnaître une substance amyloïde potentiellement communes structurelles aptatope 21. Ici, nous présentons la méthodologie utilisée dans la production SELEX de ces aptamères 21.

Les aptamères sont sélectionnés par ribo-/deoxyribo-oligonucleotides courte<em&gt; In-vitro</em&gt; Les méthodes basées sur l&#39;évolution affinité pour une cible spécifique. Les aptamères sont des outils de reconnaissance moléculaire avec polyvalente applications thérapeutiques, diagnostiques et de recherche. Nous démontrons méthodes de sélection des aptamères pour amyloïde β-protéine, l&#39;agent causal de la maladie d&#39;Alzheimer.

Sélection d&#39;aptamères pour amyloïde β-protéine, l&#39;agent causal de la maladie d&#39;Alzheimer

La maladie d'Alzheimer (MA) est un trouble neurodégénératif progressif, dépendant de l'âge, dont l'évolution insidieuse rend son diagnostic présymptomatique...

L'objectif général des expériences de sélection est de sélectionner des molécules d'ARN qui se lient spécifiquement et fortement à une protéine cible dans les sélections d'ARN. Cela est réalisé par une transcription in vitro d'ARN à partir d'une bibliothèque d'oligonucléotides d'ADN aléatoires, suivie d'une incubation du pool d'ARN transcrit avec la protéine cible. Une filtration par liaison est ensuite utilisée comme deuxième étape.Cela sépare les molécules d'ARN cibles liantes du pool d'ARN non lié. Ensuite, les molécules d'ARN cibles liantes sont éludées, transcrits inversement en ADN, amplifiés par PCR et retranscrits en ARN.Ce pool d'ARN, désormais enrichi en aptamères ayant une certaine affinité de liaison, est utilisé pour la liaison à la cible lors du prochain cycle de sélection. Généralement, après huit à vingt cycles, des aptamères spécifiques de la cible et présentant une forte avidité sont sélectionnés et caractérisés. Bonjour, je suis Gal Bean du Département de neurologie à l'UCLA, aujourd'hui Far Rahimi.Un postdoctorant expérimenté de mon laboratoire va démontrer un procédé appelé cellex. Nous avons utilisé ce procédé dans le laboratoire pour sélectionner des abers dirigés contre les oligomères bêta-amyloïdes. Commençons donc.Pour lecture, c'est à vous. Dans cette expérience précise, des ligaments protéiques stables, homogènes et libres d'agrégats, composés de la protéine amyloïde bêta Aβ40, sont préparés à l'aide de la procédure de prélèvement décrite dans un protocole vidéo Jove antérieur, avec des modifications détaillées dans le protocole écrit accompagnant. Après réticulation, purifiez le mélange de ligaments réticulés à l'aide de colonnes de désalinisation de cinq millilitres.Placez d'abord la colonne sur un support muni d'un bécher sous la sortie de la colonne. Retirez le bouchon supérieur de la colonne ainsi que le bouchon de sortie. Laissez le tampon de stockage s'écouler et recueillez-le dans le bécher.Ensuite, équilibrez la colonne avec cinq volumes de lit de résine en aliquotes de trois millilitres d'acétate d'ammonium 10 millimolaire, pH 8,3. Après l'équilibrage de la colonne, appliquez une aliquote de 0,5 millilitre du mélange réactionnel de capture sur la colonne. Laissez le mélange protéique pénétrer dans la résine et jetez l'écoulement.Dans le bécher, placer le premier tube de collecte sous la sortie de la colonne. Ajouter 0,5 millilitre de tampon acétate sur la colonne et recueillir la première fraction de 0,5 millilitre qui s'écoule. Répéter l'élution pour recueillir des fractions de 8,5 millilitres dans les tubes correspondants.Les échantillons sont caractérisés par électrophorèse SDS et mesure de l'absorbance. Combiner les fractions présentant la teneur en protéines la plus élevée et mélanger délicatement à l’aide d’une pipette, comme décrit dans le protocole écrit. Conserver un aliquot de 10 microlitres pour l’analyse en acides aminés et stocker le reste.Ensuite, préparez le pool d'ARN. Commencez par amplifier la bibliothèque d'ADN simple brin synthétique par PCR, comme décrit dans le protocole écrit accompagnant. Purifiez le produit d'ADN amplifié et vérifiez la quantité d'ADN par électrophorèse sur gel d'agarose à 2 %.En général, la concentration et le rendement en ADN sont de 160 ± 10 nanogrammes par microlitre dans un volume de 50 microlitres par tube. Ensuite, transcrire in vitro l'ADN en présence de CTP radioactif pendant la nuit, suivi d'une digestion du modèle d'ADN amplifié par l'ADN pendant quatre heures afin de générer un pool d'ARN marqué au P 32, comme décrit en détail dans le protocole écrit accompagnant. Bien que le fabricant Promega recommande une incubation de 15 minutes avec l'ADN, nous avons constaté dans nos expériences qu'une incubation de quatre heures permet une élimination complète de tout le modèle d'ADN après l'incubation avec l'ADN.Extraire l'ARN en ajoutant un volume de phényl chloroforme saturé en citrate, d'alcool isoamylique, puis en vortexant pendant environ une minute et en centrifugeant à 16 000 Gs pendant deux minutes à température ambiante. Après la centrifugation, transférer la phase aqueuse supérieure dans un tube propre. À l'aide d'une micropipette, ajouter un volume de chloroforme-alcool isoamylique, vortexer pendant une minute, puis centrifuger. Comme précédemment, éliminer la phase inférieure par aspiration à l'aide d'une micropipette.Notez que, lors de cette étape, il est plus facile de retirer la phase inférieure plutôt que la phase supérieure. La phase inférieure est éliminée comme déchet. Ensuite, précipitez l'ARN en ajoutant un volume équivalent de 0,1 volume d'acétate de sodium à 3 M et un volume équivalent d'isopropanol.Mélanger et placer au congélateur à moins 20 degrés Celsius pendant 15 minutes. Après 15 minutes, centrifuger, aspirer le surnageant et laver le culot d'ARN avec 0,5 millilitre d'éthanol à 70 % ; après le lavage à l'éthanol, centrifuger à nouveau et jeter l'éthanol. Sécher le culot d'ARN à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes dans un bloc chauffant, puis dissoudre l'échantillon d'ARN dans un tampon STE 150 millimolaire, pH 8,0, à un volume identique à celui de la réaction de transcription in vitro.Chauffer le tube contenant le produit d'ARN à 70 degrés Celsius pendant 10 minutes dans un bloc chauffant et vortexer. Pour faciliter la dissolution de l'ARN, centrifuger à vitesse maximale pendant une minute à température ambiante, conserver un microlitre d'ARN Eloqua pour le comptage par scintillation et l'électrophorèse sur gel d'urée de polyacrylamide TPE. Après dissolution de l'ARN, éliminer les nucléotides non incorporés à l'aide de colonnes G 50, conformément aux instructions du fabricant.Veillez à conserver un microlitre de l'ARN purifié par G 50 pour le comptage par scintillation et l'électrophorèse sur gel dénaturant. Utilisez les deux aliquots d'un microlitre d'ARN provenant de la précipitation de l'ARN et de l'étape de désalinisation par G 50 pour le comptage par scintillation. Calculez le pourcentage d'incorporation du marqueur après le comptage par scintillation et le calcul du pourcentage d'incorporation, puis déterminez le rendement en ARN et l'activité spécifique de l'ARN.Examinez enfin l'ARN avant et après la purification sur colonne G 50 en faisant migrer les échantillons sur un gel d'acrylamide polyacrylamide TBE 6 % contenant de l'urée, puis visualisez l'ARN par autoradiographie, comme décrit dans le protocole écrit accompagnant. Si la qualité du produit marqué est satisfaisante, passez à l'étape consistant à mélanger la banque d'ARN avec l'échantillon protéique pour les sélections. Incubez la solution d'ARN à 90 degrés Celsius pendant 10 minutes pour la dénaturer, puis à température ambiante pendant 10 minutes pour une renaturation lente.Pendant l'incubation de l'ARN, dissoudre un tube de protéine dans huit microlitres de soude à 60 millimolaire, puis ajouter 36 microlitres d'eau désionisée sans noyau. Soniquer le mélange pendant une minute et ajouter 36 microlitres de tampon de liaison ARN 2X. Pour le témoin négatif.Combiner l'ARN avec 20 microlitres de tampon de liaison 10 X ARN et compléter le volume à 200 microlitres en ajoutant de l'eau sans nucléases. Pour la réaction de liaison, combiner 20 microlitres du mélange protéine-ARN avec 20 microlitres de tampon de liaison 10 X ARN et compléter le volume à 200 microlitres à l'aide d'eau sans nucléases.Incuber les tubes pendant 30 minutes à température ambiante. Pendant l'incubation des échantillons, préparer les filtres et le dispositif de filtration. Fixer d'abord un flacon à col latéral de 125 millilitres à l'entrée de vide. Placer un support en verre fritté préalablement nettoyé pour le filtre sur le flacon à col latéral.Ensuite, équilibrez trois membranes filtrantes dans deux à trois millilitres de tampon de liaison 1X RNA dans une boîte de Pétri de 35 par 10 millimètres pendant 10 à 15 minutes. Une fois l'incubation terminée pour les échantillons de contrôle négatif et les réactions de liaison, centrifugez-les à vitesse maximale pendant cinq minutes. À température ambiante, mettez sous vide et placez la première membrane sur le verre poreux ; à l’aide d’une micropipette, déposez 0,5 millilitre de tampon de liaison pour ARN sur la membrane.Réglez le vide pour permettre un écoulement lent de chaque goutte de tampon à travers la membrane. Ce premier filtre sert uniquement à régler l'aspiration sous vide. Ensuite, placez la seconde membrane sur le verre poreux et, en utilisant le même débit, appliquez le témoin négatif sur la membrane.Après avoir appliqué l'échantillon, le laver quatre fois avec des aliquotes de 0,5 millilitre de tampon de liaison XRNA à 1 X. Retirer la membrane témoin négatif et la placer dans un tube pour comptage par scintillation. Remplacer le verre poreux par un second support en verre poreux préalablement nettoyé.Placer le troisième disque sur le verre poreux et appliquer le mélange de réaction d'hybridation. Laver le filtre comme indiqué précédemment ; le nombre de lavages peut être augmenté lors des cycles de sélection ultérieurs. Pour augmenter la sévérité des conditions de sélection, retirer le disque filtrant et le placer dans un tube de 1,6 millilitre étiqueté « réaction d'hybridation ».Réalisez un comptage par scintillation pour les deux filtres. Calculez le niveau de radioactivité liée au filtre par rapport à la quantité totale de radioactivité appliquée sur les membranes. Cela donne une indication de l'enrichissement en liaison au fur et à mesure que la sélection progresse.Après le comptage par scintillation, retirez le filtre de la réaction de liaison du tube et placez-le dans une boîte de Pétri propre et sèche de 35 sur 10 millimètres. À l’aide d’un scalpel propre et d’une paire de pinces, découpez la membrane en petits morceaux. Utilisez les pinces pour transférer les morceaux découpés dans le flacon de scintillation.Ajouter 400 microlitres de tampon d'évolution et incuber le tube à 95 degrés Celsius pendant 10 minutes. Au terme des 10 minutes, mélanger par vortexage, centrifuger le tube à vitesse maximale à température ambiante, puis aspirer et récupérer le tampon d'extraction dans un nouveau tube étiqueté. Mesurer les décomptes de radioactivité résiduels dans le tube contenant les morceaux de membrane par comptage en scintillation. Pour évaluer l'efficacité d'extraction, répéter l'extraction trois fois ; l'efficacité après trois extractions est généralement d'environ 95 à 96 %. Ensuite, ajouter trois à quatre microlitres de glycogène comme co-précipitant d'ARN, puis extraire et précipiter l'ARN libéré du filtre comme indiqué précédemment, sauf qu'il faut placer l'échantillon dans un congélateur à moins 20 degrés Celsius pendant la nuit.Après l'incubation nocturne, centrifuger l'échantillon : l'ARN précipite dans une phase liquide à peine visible. Aspirer le surnageant soigneusement sans déloger cette phase précipitée à peine visible au fond du tube. Laver le culot d'ARN avec 0,5 millilitre d'éthanol à 70 %, centrifuger pendant cinq minutes à vitesse maximale à quatre degrés Celsius, puis éliminer l'éthanol par aspiration sans déloger la phase précipitée à peine visible.Resuspendre le culot d'ARN dans 50 microlitres de tampon STE et procéder à la purification sur colonne G 50, comme décrit pour l'ARN nouvellement transcrit dans le protocole écrit joint. Pour passer au cycle suivant de sélections, effectuer une transcription inverse de l'ARN en ADN, suivie d'une amplification par PCR, comme indiqué dans le protocole écrit joint. Veiller à inclure un échantillon témoin négatif dépourvu de transcriptase inverse.Vérifiez les produits de PCR sur un gel si la bande du témoin négatif est vide et que les autres bandes sont conformes aux attentes. Passez ensuite à la transcription et à l'étiquetage de l'ARN comme indiqué précédemment pour utilisation. Au cours du prochain cycle, sélectionnez l'oligomère généré par prélèvement.Une protéine bêta 40 utilisée ici pour les sélections a été purifiée selon le protocole vidéo présenté ici, puis analysée par des mesures d'absorbance indiquées par la trace rouge et par électrophorèse SDS. La protéine sort systématiquement de la colonne dans les fractions trois à cinq, et le réactif de réticulation salut apparaît après la fraction six, indiqué par une absorbance accrue dans la fraction. L'électrophorèse SDS montre la répartition typique de tous les ligands de la bêta 40.L'intégrité de l'ARN pour chaque cycle de sélection est essentielle à la progression itérative des sélections. Après la transcription et l'étiquetage de l'ARN, la qualité de l'ARN marqué est évaluée par électrophorèse sur gel dénaturant. Voici un profil typique d'un produit d'ARN marqué intact avant et après purification sur colonne G 50. Le modèle d'ADN contaminant provenant des cycles de sélection précédents, encore présent après la réaction de transcription in vitro, pourrait réduire l'efficacité de la sélection, nécessitant ainsi davantage de cycles.L'électrophorèse sur gel d'agarose de la réaction de transcription inverse suivie d'une amplification par PCR montre le produit d'ADN attendu. L'absence de produit d'ADN dans les tubes de contrôle négatif indique une élimination réussie du modèle d'ADN grâce au traitement par l'ADNase après la transcription in vitro. Bon, nous venons de vous montrer comment sélectionner des anticorps pour des oligomères d'amyloïde bêta 40 stabilisés de manière covalente par photo-activation. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler que les deux molécules doivent posséder une structure stable afin d'assurer une forte affinité, et de garder à l'esprit qu'elles présentent toutes deux une structure tridimensionnelle au sein de laquelle elles interagissent.D'accord, c'est tout. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

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