Name: Focale modèle dischémie cérébrale par occlusion suture endovasculaire de lartère cérébrale moyenne chez le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-05T17:15:00.000+00:00
Duration: 13 min 50 s
Description: Apprenez l'occlusion endovasculaire de l'artère cérébrale moyenne chez le rat pour modéliser l'ischémie cérébrale focale. Cette technique permet d'étudier les mécanismes des lésions ischémiques et d'évaluer les stratégies thérapeutiques potentielles.

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Nous tenons à remercier Beth Rauch et l&#39;Université du Wisconsin petites Facilité d&#39;imagerie animale pour l&#39;imagerie par résonance magnétique. Le département de chirurgie neurologique à l&#39;Université de Wisconsin-Madison a fourni des fonds pour ce travail.

Modèle de rat MCAO Les préparatifs préchirurgical Une technique aseptique doit être utilisée pour toutes les procédures de survie chirurgicale. Désinfecter la surface de travail chirurgical avec désinfectant commercial et préparer stériles packs d'instruments chirurgicaux, des rideaux, de la gaze, des tampons, des sutures, et les lames de bistouri par autoclavage. Un masque chirurgical, bonnet de cheveux et gants stériles devraient être portés. Un sèche Germinator stérilisateur à billes est également utilisé pour stériliser les instruments chirurgicaux entre les procédures si chirurgies multiples chez le rat sera fait au cours d'une session. Préchauffer une couverture à chemise d'eau homéothermes et de lieu dans un tampon absorbant afin d'éviter l'hypothermie chez le rat pendant la chirurgie. <ol><li> Lieu spontanément rat hypertendu (ou souche de rats autre moyen du choix) dans une chambre d'induction et d'induire une anesthésie avec l'isoflurane à 5% (appareil d'anesthésie devrait être fixé à 1,0 L / min d'O 2 et 1,0 L / min N 2 O). Basse à 1-2% d'isoflurane pour maintenir l'anesthésie. </li><li> Appliquer une pommade artificielle larmes aux yeux à la fois. </li><li> Rasez la gorge et du cou gauche au-delà du site d'incision prospective utilisant tondeuses (Oster A5 avec # 10 lames). </li><li> Appliquer à la Bétadine un tampon de gaze et de désinfecter la peau à partir du centre de la région chirurgicale, en spirale vers l'extérieur. Rincer avec un tampon de gaze stérile contenant de l'éthanol 70%, passant pad dans un schéma similaire. Répétez les deux étapes pour un total de trois cycles. </li><li> Injecter 0,2 mL de bupivacaïne à 0,5% en sous-cutané le long du site d'incision prospective. </li><li> Placez le rat en jersey stérile ou couvrir d'un drap stérile chirurgicale. </li></ol> Occlusion transitoire de MCA <ol start="7"><li> Sous un microscope opératoire, une incision médiane ventrale est effectuée et le fascia superficiel est disséqué. </li><li> Sous l'aponévrose superficielle, il ya des tissus glandulaires de la gauche et trois muscles qui forment un triangle: le sternohyoïdien, qui se trouve sur la ligne médiane de la trachée; digastrique (facilement identifiable grâce à sa partie brillante tendineux blanc) et, enfin, le muscle sterno. </li><li> Attention dissection fine et émoussée est réalisée au sein du triangle d'identifier l'artère carotide (exclusif dissection peut être préférée par certains pour minimiser les dommages tissulaires accidentelle). Les artères externe, interne et carotide commune (CEA, l'ICA, CCA) sont exposés. L'artère carotide est grande et visiblement impulsions. Le nerf vague est vu courre le long de la face latérale des deux communes et artères carotides internes et est fortement disséqué les artères carotides internes et les communes. </li><li> Deux branches CEA sont ensuite disséqués fortement, la première branche rubrique dedans et la deuxième branche rubrique latéralement. Les deux branches sont cautérisées et coupé, ce qui permet une plus grande facilité à mobiliser les grands navires. </li><li> Le CEA est maintenant disséqué plus rostral. L'os hyoïde peuvent être rencontrés, ce qui limitera l'ampleur de la dissection rostrale. L'artère carotide externe est lié hors de distal que possible avec une suture soie 6-0. </li><li> Un autre de suture soie 6-0 est placé lâchement autour du CEA à proximité de la bifurcation avec l'ICA. Veillez à ne pas obstruer le vaisseau que la suture intraluminale à être utilisé pour l'occlusion sera passer par là à une étape ultérieure. </li><li> Microchirurgie clips sont placés sur communs et artères carotides internes à proximité de la bifurcation. </li><li> Une artériotomie partielle initiale est créée entre les deux liens de suture de soie sur l'artère carotide externe. </li><li> Introduire un 2,2 -3,0 cm de longueur de suture de monofilament en nylon 4-0, avec un repli 2,0 cm à partir de son arrondi, siliconé pointe, dans la lumière vers le bas vers la CEA de l'ACC, où le clip de microchirurgie est situé. Ces sutures sont commercialement disponibles (Doccol Corp, Redlands, CA, USA). Couper la partie restante de la CEA (à l'emplacement de l'artériotomie partielle) pour libérer le moignon et la position de la souche en dessous de la bifurcation de la CEA et l'ICA, ce sera plus facile de permettre à la suture intraluminale de glisser dans l'ACI. </li><li> Serrer la suture de soie autour du moignon CEA pour sécuriser la suture en nylon intraluminale et prévenir les saignements, puis retirez le clip microvasculaire de l'ICA. Ouvrez le clip avant de le sortir pour vérifier les saignements. </li><li> Continuer à faire progresser la suture en nylon de la CEA à l'ICA lumière de l'artère cérébrale moyenne (MCA). Cette longueur est généralement de 18-20 mm et c'est la raison pour placer un coude dans la suture avant l'insertion. Après une durée variable de suture en nylon est inséré, la résistance peut se faire sentir. Si cela se produit avec beaucoup de la suture en nylon encore présent en dehors de la cuve, il indique que la suture est susceptible d'entrer l'artère ptérygo (voir note ci-dessous). Retirez-vous et la courbe de la suture légèrement pour continuer le long de l'ICA, qui se déroulera plus en dedans. De plus, la dissection de l'origine de l'APP peut être fait pour mieux visualiser le chemindu filament intraluminale. Continuez à insérer le fil de suture en nylon jusqu'à sentir une résistance pendant et après le poste de 2 cm plié. À ce stade, la suture intraluminale a bloqué l'origine de la MCA. MCA occlusion peut être confirmée par le suivi de la réduction du débit sanguin cérébral régional aide d'un débitmètre laser Doppler (voir tableau Matériaux pour une seule source d'équipement). Notez également que l'origine de l'artère ptérygo hors de l'ICA peut être directement liée au large, si on préfère, afin d'éviter une intubation accidentelle de ce navire avec la suture intraluminale. </li><li> Démarrez le chronomètre et l'heure de début d'enregistrement d'occlusion. </li><li> Retirez le microclip de la CCA. </li><li> Fermer l'incision (derme, pannicule carnosus, les couches de tissu sous-cutané) rapidement avec suture de soie 3-0 (un modèle simple en continu faciliteront la réouverture de reperfusion) et placer soigneusement le rat dans une cage de récupération. Vérifier que le plancher de la cage autour du nez et la bouche sont libres de litière et la récupération du moniteur à partir d'anesthésie. </li></ol> Restauration de la circulation sanguine MCA (reperfusion) <ol start="21"><li> Peu avant la période d'occlusion doit se terminer, ré-anesthésier le rat, désinfecter le site d'incision avec de la Bétadine et de l'éthanol à 70% (3 cycles, comme avant) et de rouvrir l'incision en supprimant les sutures de clôture. </li><li> Placer un microclip sur le CCA, comme avant. </li><li> Retirer à mi-course de suture occlusion de l'ICA jusqu'à la fin de suture est visible à travers l'ICA. Ne PAS retirer complètement de la suture de l'ICA / CEA! </li><li> Placer un microclip sur l'ICA dessus de l'extrémité de la suture intraluminale. </li><li> Supprimer complètement la suture d'occlusion et attacher solidement la souche de la CEA. Terminer l'enregistrement de l'occlusion (début de reperfusion) du temps. </li><li> Retirez le microclip de l'ICA. </li><li> Retirez le microclip de la CCA. </li><li> Humidifiez la région avec quelques gouttes d'une solution saline stérile et fermer les couches incision (derme, pannicule carnosus, tissu sous-cutané) avec 3-0 suture de soie en utilisant un modèle simple interrompu. </li><li> Administrer 0,05 mg / kg de buprénorphine (ou d'autres analgésiques post-opératoires après vos directives institutionnelles) dans l'espace péritonéal. </li><li> Injecter par voie intrapéritonéale 5cc de salines préchauffée. Cela fournira une hydratation pendant la phase de récupération. </li><li> Surveiller le rétablissement de rat de l'anesthésie. </li><li> Après que le rat a récupéré, le test de comportement pour l'indication de l'infarctus en tenant le rat par la queue et en observant si le rat peut se tourner vers les deux côtés. Curling d'un côté seulement est prévu. Échelles de notation simple peut être utilisé pour enregistrer initiales post-infarctus fonctionnement comportementaux (voir discussion). </li><li> Injections supplémentaires de la buprénorphine (même dose que ci-dessus) doit être administrée tous les 6 à 8 heures pour 24 heures de soulagement de la douleur. Prolongez l'analgésie si l'animal montre des signes de malaise. </li></ol> Les résultats représentatifs <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. L'occlusion de l'artère cérébrale moyenne par suture endovasculaire. Un schéma simplifié du système circulatoire crânienne du rat est montré avec une suture intraluminale siliconé occultant l'origine de la MCA. L'arthrose et les branches ST hors de la CEA gauche ont été ligaturés et d'une cravate de suture autour du moignon CEA détient la suture intraluminale en place. ACA, artère cérébrale antérieure; BA, basilaire artère; CCA, l'artère carotide commune; CEA, carotide externe artère; ICA, artère carotide interne; MCA, l'artère cérébrale moyenne; l'arthrose, l'artère occipitale; PCA, l'artère cérébrale postérieure; PComA, communicante postérieure artère; APP, l'artère ptérygo; ST, l'artère thyroïdienne supérieure. Figure adaptée de Sasaki et al. 4 et Lee 3. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Représentant imagerie par résonance magnétique de coupes coronales du cerveau de rat 24 heures après MCAO transitoires 1 heure. Œdème cérébral qui accompagne l'ischémie focale est visualisée dans séquences pondérées en T2 IRM. La zone de l'infarctus apparaît hyperintenses (lumineux) sur les images T2. Modèles similaires d'infarctus peut être vu avec des techniques plus avancées telles que l'IRM de diffusion et de l'imagerie pondérée coefficient apparent de diffusion de cartographie 5. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. Représentant coupes coronales de cerveau de rat tachés avec TTC 24 heures après MCAO transitoires 1 heure. Coloration TTC révèle blanc (non coloré) infarci régions du cortex cérébral et du striatum chez le rat même que celui montré dans la figure 2. Notez que le schéma général de focale des lésions ischémiques est similaire à celle observée dans l'IRM en pondération T2, bien que la zone d'infarctus final déterminé histologiquement peut être légèrement plus petite que la lésion T2.

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</ol>

Les auteurs n&#39;ont aucun intérêt à divulguer contradictoires. Ce protocole a été approuvé par le soin des animaux et du Comité institutionnel Utiliser à l&#39;Université de Wisconsin-Madison School of Medicine et la santé publique et respecte les National Institutes of Health des lignes directrices pour l&#39;utilisation des animaux de laboratoire.

Des modèles de rongeurs d&#39;ischémie cérébrale peut être classé comme globale ou focale et aussi réversible ou irréversible. Nous utilisons un modèle d&#39;ischémie focale réversibles afin de mimer l&#39;reperfusion qui peuvent survenir chez l&#39;homme après recanalisation patients victimes d&#39;AVC. Alors que la part du rat l&#39;avantage de la circulation crânienne semblable à l&#39;humain, la circulation collatérale étendue intracrânienne due au Cercle de Willis et leptoméningées résultats anastomoses dans les volumes d&#39;infarctus incompatibles 6. Nous utilisons le rat spontanément hypertendu (SHR) souche parce taille de l&#39;infarctus est plus grande dans SHR exposés à une ischémie cérébrale focale par rapport à des rats normotendus 7-10. L&#39;induction des maladies dans le SHR est également plus conforme et peut générer moins de mortalité que dans d&#39;autres souches couramment utilisées 11. En outre, les paramètres physiologiques doivent être surveillés tout au long de la chirurgie, car les fluctuations peuvent ajouter à la variabilité des volumes d&#39;infarctus; ces paramètres comprennent la pression artérielle, artérielle en O 2 et CO 2 niveaux, l&#39;hypothermie, et l&#39;hyperglycémie, qui peuvent aggraver les lésions ischémiques 2,12 . L&#39;hypothermie est particulièrement préoccupante car elle peut diminuer le degré de lésion ischémique neuronales, et donc, en plaçant le rat sur un coussin chauffant thermorégulation pendant la chirurgie est essentielle. Nous employons préparés commercialement siliconé sutures dans cette procédure dans une tentative d&#39;accroître la cohérence dans la taille de l&#39;infarctus 13-15. Traditionnellement, les sutures intraluminale utilisé pour occlure le MCA ont été préparés par la flamme-arrondi une pointe de suture 3-0 en nylon ou en utilisant un pistolet à colle chaude pour bien enrober la pointe de suture avec un petit cordon de colle 16. Ces procédures produisent des sutures avec des diamètres variant pointe et donc, peut exiger plusieurs tentatives avant de trouver l&#39;occlusion d&#39;une suture qui correspond au diamètre du vaisseau d&#39;un rat donné. D&#39;autres variantes de la méthode décrite dans MCAO cette vidéo comprennent l&#39;occlusion plus distale, épargnant les branches lenticulostriées afin d&#39;avoir un pur infarctus corticaux 17, et l&#39;occlusion simultanée de la MCA et ipsilatérale artère carotide commune pour réduire la circulation collatérale 6,9. Les effets fonctionnels de la course peut être évaluée en utilisant une variété de tests de comportement, dans laquelle les déficits dans des tâches spécifiques sont reflétées dans une échelle de notation simple. Par exemple, Bederson et al. 18 développé un rat neurologiques classement score sur la mesure de la flexion du membre antérieur dans une position corporelle élevée, la résistance asymétrique à une poussée latérale, et le comportement en plein champ encerclant. Rats s&#39;étendant à la fois membres antérieurs à l&#39;étage où élevés et ne présentant pas de déficits d&#39;autres ont été classés «Normal (0)», tandis que des rats avec une flexion des membres antérieurs controlatéraux seulement ont été classés avec les &quot;déficits modérés (1)». «Sévère de grade 2&quot; rats affiché diminution de la résistance du côté controlatéral à une force latérale et &quot;sévère de grade 3&quot; rats de plus engagés dans encerclant les comportements. Grade inférieur déficits comportementaux ont toujours été observées dans le grade immédiatement supérieur (par exemple, de grade 2 et 3 animaux ont aussi affiché une flexion des membres antérieurs) et ces scores étaient prédictifs des différences de taille de l&#39;infarctus de 18 ans. Ainsi, un tel système de notation simple permet une rapide, cohérente évaluation semi-quantitative des déficits fonctionnels d&#39;un AVC. Mesure de l&#39;étendue de l&#39;infarctus cérébral est communément réalisé par coloration histologique des lésions tissulaires utilisant TTC, le violet de crésyl (Nissl tache) ou l&#39;hématoxyline et l&#39;éosine. Magnétiques des techniques d&#39;imagerie par résonance, y compris la diffusion IRM pondérée de visualiser l&#39;infarctus à des moments tôt après l&#39;occlusion, permettant la détermination d&#39;un volume de l&#39;infarctus chez chaque rat individu sans la nécessité pour la récolte de tissus. Ceci est particulièrement utile dans les études visant à déterminer l&#39;efficacité d&#39;un traitement neuroprotecteur suite d&#39;un AVC, l&#39;imagerie du rat après administration du traitement, mais MCAO avant donne confiance enquêteur que tous les animaux expérimentaux et de contrôle expérimentés coups similaires pour commencer, de réduire les effets confondants de la variabilité dans l&#39;induction de course.

<table><tbody><tr><td> Suture en nylon 4-0</td><td>Doccol Corporation</td><td></td><td>Longueur du revêtement en silicone de 2 à 3 mm, diamètre de la pointe de 0,39 mm</td></tr><tr><td>Rats spontanément hypertendus</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>290-300 g, mâles</td></tr><tr><td>Pompe et plaquettes thermorégulatrices Gaymar T/Pump</td><td>Gaymar Industries</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unité électrochirurgicale bipolaire Vetroson V-10</td><td>Summit Hill Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stérilisateur à billes de verre Germinator 500</td><td>CellPoint Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Moniteur de perfusion sanguine Vasamedics Bpm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;Laserflo</td><td>TSI Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

focale modèle d&#39;ischémie cérébrale par occlusion suture endovasculaire de l&#39;artère cérébrale moyenne chez le rat

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

L&#39;AVC est la principale cause d&#39;invalidité et la troisième cause de décès chez les adultes dans le monde 1. En course humaine, il existe un état clinique très variable; dans le développement de modèles animaux d&#39;ischémie focale, cependant, la réalisation de la reproductibilité de volume de l&#39;infarctus induite expérimentalement est essentielle. Le rat est un modèle animal largement utilisé pour la course en raison de sa relativement faible des coûts d&#39;élevage et à la ressemblance de sa circulation crânienne à celui des humains 2,3. Chez l&#39;homme, l&#39;artère cérébrale moyenne (MCA) est plus fréquemment touchées dans les syndromes AVC et de multiples méthodes de MCA occlusion (MCAO) ont été décrits pour imiter ce syndrome clinique dans des modèles animaux. Parce que la recanalisation survient fréquemment après un AVC aigu chez l&#39;homme, la reperfusion après une période d&#39;occlusion a été inclus dans plusieurs de ces modèles. Dans cette vidéo, nous démontrons le transitoire de suture endovasculaire modèle MCAO chez le rat spontanément hypertendu (SHR). Un filament d&#39;une couche de silicium est placée la pointe lumière intestinale à l&#39;origine du MCA pendant 60 minutes, suivie d&#39;une reperfusion. Notez que la période d&#39;occlusion optimale peut varier dans d&#39;autres souches de rats, comme des rats Wistar ou Sprague-Dawley. Plusieurs indicateurs comportementaux d&#39;AVC chez le rat sont représentés. Ischémie focale est confirmée en utilisant séquences pondérées en T2 par résonance magnétique et par la coloration des coupes de cerveau avec du chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) 24 heures après MCAO.

L&#39;induction chirurgicale d&#39;une lésion cérébrale ischémique chez le rat est un modèle largement utilisé pour la recherche sur les AVC. Ici nous démontrons l&#39;induction d&#39;une ischémie cérébrale focale par occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne. Visualisation de l&#39;infarctus entraînant par coloration histologique et l&#39;imagerie par résonance magnétique est également représentée.

Focale modèle d&#39;ischémie cérébrale par occlusion suture endovasculaire de l&#39;artère cérébrale moyenne chez le rat

L'accident vasculaire cérébral (AVC) est la principale cause d'invalidité et la troisième cause de décès chez les adultes dans le monde1. Dans l'AVC humain, il existe une variabilité élevée...

Dans cette vidéo, nous démontrerons une méthode permettant de provoquer un infarctus cérébral par occlusion endovasculaire de l'artère cérébrale moyenne chez le rat. Ce modèle animal, largement utilisé en recherche sur l'accident vasculaire cérébral, induit une ischémie du cortex cérébral ainsi que des structures sous-corticales, notamment des ganglions de la base et de l'hypothalamus. Ce modèle peut provoquer une ischémie cérébrale permanente ou transitoire.En fonction du fait que le fil intraluminal soit laissé en place ou retiré après une période de temps définie. L'ischémie cérébrale provoque un noyau d'infarctus dans lequel se produit la mort cellulaire, et une région péri-ischémique appelée la pénombre dans laquelle une certaine récupération cellulaire peut être possible. Avant de commencer, prenons un moment pour décrire les étapes que nous allons suivre.Ici, nous observons un schéma simplifié du système circulatoire crânien du rat. Lors de cette intervention chirurgicale, nous allons exposer l'artère carotide gauche près de la bifurcation de l'artère carotide commune, ou CCA, en l'artère carotide externe (ECA) et l'artère carotide interne (ICA). Deux petites branches de l'ECA, l'artère occipitale et l'artère thyroïdienne supérieure, seront ligaturées à l'aide d'une coagulation bipolaire, et l'ECA sera fermée ligaturée distalement à ces deux branches. À l'aide d'un fil de soie, des pinces microvasculaires seront placées sur les artères carotide commune et carotide interne.Un fil de suture en monofilament de nylon doté d'une pointe revêtue de silicone sera ensuite inséré par une incision dans l'artère carotide externe (ECA) et dirigé vers le haut dans l'artère carotide interne (ICA). Ce fil intraluminal est légèrement fixé en place à l'aide d'un fil de soie autour de l'ECA avant de relâcher la pince microchirurgicale de l'ICA. Le fil de suture intraluminal en nylon est alors avancé d'environ deux centimètres jusqu'à ce que la pointe en silicone obstrue l'origine de l'artère cérébrale moyenne ou MCA.Le deuxième clip micro est retiré de l'artère carotide commune et la durée d'occlusion est mesurée. Maintenant que nous avons passé en revue la procédure, passons à la chirurgie. Préparez le rat comme vous le feriez pour toute intervention chirurgicale, conformément aux directives de soins aux animaux de votre établissement. Nous plaçons le rat sous anesthésie en utilisant 5 % d'isoflurane pour l'induction, avec un débit de un litre par minute d'oxygène et un litre par minute de protoxyde d'azote. Nous réduisons ensuite la concentration d'isoflurane à 1 à 2 % pour le maintien de l'anesthésie.Une fois le plan d'anesthésie atteint, nous appliquons un onguent ophtalmique artificiel sur les deux yeux et nous rasons le cou à l'aide d'un tondeur. La région est ensuite désinfectée avec une solution de bétadine, suivie d'éthanol à 70 %. Ce processus doit être répété pour un total de trois cycles de rinçages à la bétadine et à l'éthanol à 70 %.Le rat est placé dans une chaussette stérile et posé sur une couverture thermorégulée. Pour prévenir l'hypothermie. Il est utile de surélever légèrement le cou en glissant un tube conique de 15 ml sous la tête du rat.Cela facilitera l'exposition des artères carotides par la suite. Enfin, 0,2 mils d'une solution de vácating à 0,5 % sont injectés par voie sous-cutanée le long du site de l'incision prévue afin d'assurer un soulagement de la douleur postopératoire sous un microscope opératoire. Réalisez une incision médiane à l'aide d'une lame de bistouri n° 10.La dissection restante s'effectuera du côté gauche de l'animal par rapport à la ligne médiane. Commencez par disséquer le fascia superficiel. Cette étape est réalisée à l'aide d'une combinaison de dissection émoussée et de dissection tranchante.Un tissu glandulaire étendu est visible latéralement, tandis que le grand muscle sternalod se situe en ligne médiane. Utilisez des applicateurs en coton pour disséquer la glande latéralement et le muscle sterno-hyoïdien médialement. Sous le tissu glandulaire, vous verrez les muscles digastriques et sterno-mastoïdiens, qui, avec le muscle sterno-hyoïdien en ligne médiane, forment un triangle musculaire subtil dont l'apex est entouré d'un cercle.C'est dans ce triangle que la dissection se poursuivra jusqu'à l'artère carotide. Utilisez des ciseaux microchirurgicaux pour couper la fascia recouvrant les muscles. Cela permettra de rétracter les muscles afin d'exposer les vaisseaux sous-jacents.Des applicateurs en coton peuvent être utilisés pour rétracter les muscles et mettre en évidence les artères carotides commune, externe, profonde et interne. Poursuivez l'exposition de l'artère carotide externe (ECA) le long de ses branches. Cela nécessitera une dissection fine et précise des vaisseaux. L'objectif de ces étapes est de libérer l'artère carotide externe (ECA) et l'artère carotide interne (ICA) du tissu conjonctif sous-jacent. Poursuivre la dissection de l'ECA. Remarquer que l'os du talon (HI) peut être rencontré, ce qui limitera l'étendue de la dissection rostrale.Le nerf vague, qui apparaît blanc, est visible le long de la face latérale des artères carotides communes et internes, et nous l'avons disséqué soigneusement à partir de la CCA et de la CIA. Deux branches provenant de l'artère carotide externe sont également disséquées avec précision. La première branche orientée latéralement est l'artère occipitale et la seconde branche orientée médialement est l'artère thyroïdienne supérieure.Les deux premières branches de l'artère carotide externe sont cautérisées, puis sectionnées. La section de ces branches facilite davantage la mobilisation des vaisseaux. Ultérieurement dans la procédure, ligaturer solidement l'artère carotide externe à l'aide d'un fil de soie aussi distalement que possible.Placer une autre suture en soie lâchement autour de l'artère carotide externe (ECA) en amont de la bifurcation de l'artère carotide commune. Veiller à ne pas obstruer le vaisseau avec ce lien, car la suture endovasculaire utilisée pour l'occlusion de l'artère cérébrale moyenne passera par ce segment de l'ECA. Placer des pinces microvasculaires sur l'artère carotide commune et sur l'artère carotide interne.Cette position est légèrement éloignée par rapport à l'origine de l'artère carotide externe (ECA). Ensuite, réalisez une artérotomie partielle entre les deux ligatures en soie de l'ECA. Une petite quantité de sang résiduel peut s'échapper, mais un saignement abondant indique probablement un clampage incorrect à l'aide des pinces microvasculaires.Dans ce cas, veillez à ce qu'aucun tissu sous-jacent n'ait été pris dans les lames de la pince, ce qui empêcherait une fermeture complète. L'étape suivante consiste à insérer un morceau de suture en nylon monofilament d'une longueur de trois centimètres dans l'artère carotide externe. Il est utile de marquer la suture à deux centimètres de son extrémité recouverte de silicone.Ces sutures sont disponibles commercialement, et le diamètre de la pointe ainsi que la longueur du revêtement en silicone peuvent être conçus sur mesure selon vos spécifications, en fonction de l'âge et du poids des rats que vous utilisez. Pour des rats de 300 grammes, nous utilisons une suture en nylon 4-0 ayant un diamètre de pointe de 0,39 millimètre et une longueur de revêtement en silicone de deux à trois millimètres. Introduisez la suture en nylon obstruante dans la lumière de l'artère carotide externe en direction de l'artère carotide commune.Serrer le point de suture en soie autour du moignon d'artère carotide externe pour fixer le point de suture intraluminal en nylon et prévenir tout saignement. Couper la partie restante de l'artère carotide externe afin de libérer le moignon et positionner ce dernier sous le point de bifurcation de façon qu'il soit approximativement aligné avec l'artère carotide interne. Cela permettra plus facilement au point de suture intraluminal de glisser dans l'artère carotide interne.Retirer la pince microvasculaire de l'artère carotide interne. Penser à ouvrir lentement les pinces pour vérifier la présence d'un saignement avant de les retirer complètement. Continuer à avancer le fil de nylon dans la lumière de l'artère carotide interne jusqu'à ce qu'il atteigne l'artère cérébrale moyenne.Cette longueur est généralement d'environ deux centimètres et justifie le fait de placer une marque sur le fil avant son insertion. Après l'insertion d'une longueur variable de fil de nylon, une résistance peut être ressentie ; si cette résistance apparaît alors qu'une grande partie du fil de nylon est encore située à l'extérieur du vaisseau, cela indique probablement que le fil pénètre dans l'artère tégo-palatine. Dans ce cas, retirer légèrement le fil et le courber légèrement afin de poursuivre le long de l'artère carotide interne, qui suit un trajet plus direct.Remarquez le changement de position du fil à l'intérieur de la lumière de l'artère carotide interne sur ces deux clichés comparatifs. Poursuivez en avançant le fil à travers l'artère carotide interne jusqu'à ce qu'une grande partie du fil soit insérée et qu'une résistance soit à nouveau ressentie à ce niveau. Le fil intraluminal obstrue l'origine de l'artère cérébrale moyenne.Démarrez le chronomètre et enregistrez l'occlusion. Heure de début. Retirez l'autre clip microvasculaire de l'ACC, puis refermez rapidement et soigneusement l'incision.Placer le rat dans une cage de récupération. Vérifier que le plancher de la cage autour du nez et de la bouche est dégagé des matériaux d’habitat peu de temps avant la fin de la période d’occlusion, anesthésier le rat et rouvrir l’incision en retirant les points de suture de fermeture. Placer une pince microchirurgicale sur l’artère carotide commune comme précédemment.Retirer partiellement le point d’occlusion de l’artère carotide interne (ICA) jusqu’à ce que l’extrémité du fil soit visible à travers l’ICA. Ne pas encore retirer complètement le fil. Toutefois, placer un autre clip microchirurgical sur l’ICA au-dessus de l’emplacement du fil intraluminal, retirer entièrement le point d’occlusion, puis ligaturer le moignon de l’artère carotide externe (ECA).Enregistrez l'heure de début de la reperfusion. Retirez les micro-clips de l'artère carotide interne et de l'artère carotide commune en les humidifiant avec plusieurs gouttes de solution saline stérile, puis fermez l'incision par points de suture. Nous injectons de la buprénorphine à une dose de 0,05 milligrammes par kilogramme de poids corporel afin d'assurer une analgésie postopératoire supplémentaire.Nous administrons également cinq mils de sérum physiologique par voie intrapéritonéale afin d'assurer l'hydratation pendant la phase de rétablissement. Une fois que le rat s'est réveillé de l'anesthésie, évaluez les signes comportementaux d'infarctus en tenant le rat par la queue et en observant s'il est capable de tourner des deux côtés lors de ce test de balancement corporel surélevé, le rat ne se recroquevillant normalement que d'un seul côté. Les rats présentant des symptômes d'accident vasculaire cérébral peuvent également décrire des cercles d'un seul côté lors de déplacements en champ ouvert.Ici, nous présentons les résultats d'une occlusion de l'artère cérébrale moyenne (MCA) pendant 60 minutes chez des rats spontanément hypertendus. Une imagerie par résonance magnétique a été réalisée 24 heures après l'occlusion de l'artère cérébrale moyenne (MCAO), et des images pondérées en T2 sont montrées. Ce rat a développé un large infarctus impliquant les régions corticales et sous-corticales.La zone hyperintense sur l'IRM est mise en évidence en jaune, bien que nous ne montrions pas les résultats ici. Les zones d'infarctus visualisées par IRM peuvent être analysées plus en détail par imagerie en pondération diffusion et par les cartes du coefficient de diffusion apparent. Les régions infarctus sont également confirmées par coloration histologique de sections cérébrales fraîchement isolées au chlorure de thréonine tétra-allium ou au chlorure de thréonine tétra-allium (TTC) ; la déshydrogénase vivante dans le tissu transforme le substrat en un colorant rouge insoluble.Ainsi, les régions infarctisées restent non colorées et apparaissent blanches. Notez que la taille de l'infarctus peut être influencée par plusieurs facteurs, notamment la souche de rat et la taille de l'animal. Nous utilisons des rats spontanément hypertendus car ils produisent des tailles d'infarctus plus reproductibles que d'autres souches couramment utilisées, telles que les rats frogg, dolly ou wistar.Il est également important de standardiser un poids cible de rat afin de réduire les variations du diamètre des vaisseaux et, par conséquent, d'assurer une efficacité constante de l'occlusion de l'AMC. Nous espérons que cette vidéo vous sera utile pour réaliser la technique d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne dans votre propre laboratoire. Merci d'avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.

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Nous démontrons dans la vidéo un procédé pour produire une occlusion de l'artère cérébrale moyenne chez des souris adultes en utilisant un monofilament intraluminale. Nous montrons aussi comment évaluer l'étendue de l'infarctus cérébral par le chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) coloration.

Modèle murin d&#39;occlusion artère cérébrale moyenne

Cette vidéo montre la procédure d’occlusion distale permanente de l’artère cérébrale moyenne, ou MCAO, avec la ligature de l’artère carotide commune, ou ligature CCA, chez des rats âgés pour modéliser l’AVC ischémique. Cela bloque le flux sanguin vers le cerveau, entraînant la mort neuronale et générant un modèle pour étudier les mécanismes de l’AVC et les traitements potentiels.

Induction d’une ischémie par occlusion de l’artère cérébrale moyenne et de l’artère carotide commune dans un modèle de rat

Source : Larpthaveesarp, A., et. al. Modèle d’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne d’un accident vasculaire cérébral néonatal chez des rats P10. J. vis. exp. (2017)Cette vidéo démontre l’établissement du modèle d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez un rat. L’artère carotide interne (ICA) est exposée et une ligature est sécurisée pour limiter l’afflux sanguin. Une occlusion est insérée à travers l’ICA pour atteindre l’artère cérébrale moyenne. Le petit est ensuite laissé...

Génération d’une occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez un petit rat pour induire une ischémie cérébrale locale

Nous décrivons une méthode hautement reproductible pour l'occlusion permanente d'un important vaisseau sanguin cérébral des rongeurs. Cette technique peut être accompli avec très peu de dommages périphérique, la perte de sang minime, un taux élevé de survie à long terme, et le volume de l'infarctus cohérent en rapport avec la population clinique humaine.

Permanent occlusion des vaisseaux cérébraux<em&gt; Via</em&gt; Double ligature et Transection

Nous présentons ici un protocole pour produire une occlusion permanente distale de l'artère cérébrale moyenne chez les rats femelles âgées avec occlusion simultanée des artères carotides de produire de grandes infarctus corticaux et des déficits subis. Nous montrons la confirmation de la taille de la lésion en utilisant l'IRM structurelle à 24 h et 8 semaines après un AVC.

Exécution distale permanente Moyen cérébrale avec l&#39;artère carotide commune occlusion chez les rats âgés pour étudier corticale ischémie avec une incapacité prolongée

Nous décrivons un modèle murin d’AVC induit par l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne à l’aide d’une suture recouverte de silicone. Le protocole peut être appliqué pour induire une occlusion permanente ou une ischémie temporaire, suivie d’une reperfusion.

Induction de l&#39;AVC ischémique et ischémie-reperfusion chez la souris Utilisation de l&#39;artère moyenne Occlusion Technique et visualisation des Infarctus Zone

Un modèle murin d’ischémie-reperfusion cérébrale est mis en place pour étudier la physiopathologie des accidents vasculaires cérébraux. Nous distalement ligaturer l’artère cérébrale moyenne droite et artère carotide commune droite et restaurer le flux sanguin après 10 ou 40 min d’ischémie.

Modèle de souris de deux vaisseaux Occlusion d’ischémie-reperfusion cérébrale

Ce protocole décrit le modèle d’ischémie cérébrale focale transitoire chez la souris par occlusion intraluminale de l’artère cérébrale moyenne. De plus, des exemples d’évaluation des résultats sont présentés à l’aide de l’imagerie par résonance magnétique et de tests comportementaux.

Modèle d’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne de l’AVC

Le protocole actuel décrit un modèle de rat d’occlusion/reperfusion de l’artère cérébrale moyenne qui préserve la structure anatomique des vaisseaux cérébraux sans causer de dommages.

Un modèle chez le rat d’occlusion/reperfusion de l’artère cérébrale moyenne sans endommager la structure anatomique des vaisseaux cérébraux

Les modèles in vivo chez le rat sont des outils indispensables pour étudier les mécanismes pathologiques et les cibles thérapeutiques de l’AVC ischémique. Ce travail décrira la réalisation d’une coloration par immunofluorescence dans des coupes de cerveau infarctus après une occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO) chez le rat.

Évaluation de la signalisation de la mort cellulaire par immunofluorescence dans un modèle d’AVC ischémique chez le rat

L’objectif de cette étude était d’établir une méthode reproductible pour réaliser une craniectomie suivie d’une obstruction permanente et sélective de l’artère cérébrale moyenne chez le rat, pour une application dans des études expérimentales sur les déficits de la mémoire motrice et spatiale.

Occlusion sélective et permanente de l’artère cérébrale moyenne chez les rats : une approche expérimentale pour étudier les déficits de la mémoire motrice et spatiale

Apprenez l'occlusion endovasculaire de l'artère cérébrale moyenne chez le rat pour modéliser l'ischémie cérébrale focale. Cette technique permet d'étudier les mécanismes des lésions ischémiques et d'évaluer les stratégies thérapeutiques potentielles.

Focale modèle d'ischémie cérébrale par occlusion suture endovasculaire de l'artère cérébrale moyenne chez le rat

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