Name: Flash de congélation et Cryosectioning E12.5 cerveau de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: Apprenez les techniques de congélation rapide et de cryosectionnement du cerveau embryonnaire de souris E12.5. Cette méthode utilise l'OCT et le cryostat pour obtenir des coupes tissulaires de haute qualité sans fissures ni distorsions.

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<ol><li> Fixer le tissu dans du paraformaldéhyde 4% dans du PBS pendant le temps désiré. </li><li> Saccharose infuser tissus (cryoprotection) <ol><li> Faire solution de saccharose à 30% dans le PBS p / v en 2059 tube. </li><li> Rincez le tissu 3x dans du PBS (~ 5 min avec bascule). </li><li> Tissulaire lieu en solution de saccharose à 30%. Tissus ne va pas couler. </li><li> Placez le tissu dans 4 ° C pendant la nuit, ou jusqu&#39;à ce qu&#39;il ait coulé. </li></ol></li><li> Taille de l&#39;étiquette appropriée cryomold d&#39;information et d&#39;orientation. </li><li> Remplissez cryomold avec OCT (éviter les bulles). </li><li> Transfert des tissus à bain d&#39;PTOM et l&#39;enrober avec octobre </li><li> Transfert des tissus aux PTOM cryomold. </li><li> Orienter les tissus sous microscope. </li><li> Verser l&#39;azote liquide dans une boîte de Petri en plastique. </li><li> Rapidement et soigneusement bas le tissu dans cryomold dans l&#39;azote. (Ne pas immerger le haut de la cryomold.) </li><li> Lorsque l&#39;OCT est solide blanc, placez le tissu congelé en congélateur à -80 ° C pour le stockage. </li><li> Equilibrer les tissus à ~ 20 ° C pendant au moins 30 min. avant la coupe. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Moule Tissue-Tek Cryomold</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Solution de saccharose</td><td></td><td></td><td>Solution de saccharose à 30 % dans du PBS (poids/volume)</td></tr><tr><td>paraformaldéhyde</td><td></td><td></td><td>Paraformaldéhyde à 4 % dans du PBS</td></tr></tbody></table>

flash de congélation et cryosectioning e12.5 cerveau de souris

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

<p class="jove_content">Démonstration dans cette vidéo sont les techniques pour flash de congélation et de sectionnement des tissus cérébraux embryonnaires à partir de la souris. Conseils utiles pour l&#39;utilisation du cryostat sont donnés, y compris les méthodes de dépannage qui peut être utilisé pendant la coupe pour s&#39;assurer que les sections résultante tissus sont exempts de fissures et d&#39;autres distorsions.</p>

Flash de congélation et Cryosectioning E12.5 cerveau de souris

<p>Bonjour, je suis Spencer Curley de l'Université de Californie à Irvine et du laboratoire d'Ed Maki, et je vais vous montrer comment réaliser une cryosection. Pour cela, j'utilise tout d'abord ces réactifs couramment utilisés. Le composé d'inclusion, ou milieu d'inclusion, que j'utilise s'appelle OCT, pour optimal cutting temperature.</p><p>C'est une solution limpide, très épaisse et visqueuse, qui maintient bien le tissu en place pendant que vous l'orientez, puis elle gèle. En fin de compte, elle est soluble dans l'eau, ce qui permet de l'éliminer pendant toute procédure de coloration. J'incorpore donc le tissu dans un moule. Ces récipients-biopsie en cryomoule existent en différentes tailles.</p><p>J'utiliserai ce petit moule ici car je travaille avec des tissus embryonnaires de souris. Nous congélons rapidement nos tissus dans de l'azote liquide. Tout d'abord, je vais remplir cette fiole vide sous vide protectrice avec de l'azote liquide à partir de notre réservoir ici.</p><p>Avant de congeler rapidement le tissu, vous devez procéder à une cryoprotection du tissu, sinon le gel lui-même détruirait le tissu. Pour cela, vous immergez le tissu dans une solution de saccharose à 30 % pendant toute une nuit</p>

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Cette vidéo démontre la cryoconservation du cerveau d’une souris pour isoler des zones anatomiques discrètes ou des populations cellulaires spécifiques des tissus tumoraux. Cette technique est essentielle pour obtenir une résolution optique optimale de la morphologie du tissu cérébral pour une analyse ultérieure.

Cryoconservation du cerveau murin par congélation instantanée : une technique pour congeler rapidement un échantillon entier de cerveau de souris pour une analyse histologique

Dans cette vidéo, nous montrons la section d’un tissu tumoral cérébral de souris congelé à l’aide d’un cryostat. Les coupes de tissu cérébral congelé ainsi obtenues sont stockées à basse température jusqu’à une analyse plus approfondie.

Coupe de tissu cérébral de souris congelée : une procédure pour obtenir de fines sections de tissu congelé à partir de tissu cérébral murin congelé

Cette vidéo présente un protocole détaillé, étape par étape, pour la préparation de coupes de tissus cérébraux de souris congelés pour des analyses en aval.

Traitement du cerveau d’une souris pour l’analyse en aval

Nous présentons ici un protocole visant à geler et l’article de tissus cérébraux de plusieurs animaux comme une alternative de gagner du temps aux cerveaux unique de transformation. Cela réduit la variabilité coloration en immunohistochimie et réduit d’imagerie et de temps cryosectioning.

Cryosectioning simultanée de plusieurs cerveaux de rongeurs

Cette procédure décrit la collecte de régions cérébrales congelées discrètes pour obtenir des protéines et de l’ARN de haute qualité à l’aide d’outils peu coûteux et couramment disponibles.

Collection de régions de cerveau de rongeur congelés pour des analyses en aval

Ce protocole décrit une méthode permettant de combiner l’hybridation in situ par fluorescence (FISH) et l’immunohistochimie par fluorescence (IHC) dans des coupes de cerveau de souris fraîches, congelées et fixes, dans le but d’obtenir un signal FISH et IHC de fluorescence multimarqueur. L’IHC a ciblé les protéines cytoplasmiques et membranaires.

Combinaison de l’hybridation <em>in situ</em> par fluorescence multiplex avec l’immunohistochimie fluorescente sur des coupes de cerveau de souris fraîches, congelées ou fixes

Une méthode pratique de perfusion par gravité pour l’analyse histologique du système nerveux central de la souris est présentée. La détection immunofluorescente de la α-synucléine phosphorylée est démontrée dans un modèle murin de la maladie de Parkinson. Ce travail décrit également de manière exhaustive les étapes de perfusion transcardique, de dissection, de congélation /intégration des tissus et de sectionnement congelé.

Une méthode de perfusion transcardique alimentée par gravité pour l’analyse histologique du système nerveux central de la souris

Le présent protocole décrit une stratégie pratique pour accélérer l’étape de vérification des coordonnées d’injection stéréotaxique avant d’effectuer le traçage viral à l’aide de colorants et de coupes congelées.

Validation préliminaire des coordonnées d’injection stéréotaxique par cryosectionnement

Cette étude présente un protocole simplifié pour le traitement des tissus impliquant la décapitation, la fixation, la cryosection, la coloration par fluorescence, l’immunocoloration et l’imagerie, qui peut être étendu à l’imagerie confocale et multiphotonique. La méthode maintient une efficacité comparable à celle des dissections complexes, en contournant le besoin de motricité avancée. L’analyse quantitative d’images offre un vaste potentiel d’investigation.

Cryosectionnement direct des têtes de <em>drosophile</em> pour une coloration par fluorescence cérébrale et une immunocoloration améliorées

La rétine présente une organisation spatiale complexe à travers sa structure laminaire. Les techniques modernes de transcriptomique spatiale et de séquençage nécessitent des coupes de tissus &lt; 20 μm d’épaisseur, ce qui limite leur applicabilité à la recherche rétinienne. Cette méthode de cryosectionnement fraîchement congelée produit de fines sections de la rétine de la souris tout en préservant les relations spatiales planes, permettant une cartographie moléculaire complète à travers les...

<em>En face</em> Cryosectionnement de la rétine de souris pour l’analyse moléculaire spatiale de haute dimension

Ce protocole standardise la tomographie cryo-électronique (cryo-ET) pour les tissus épais en intégrant la gelation à haute pression (HPF) avec la méthode gaufreuse, le levage par faisceau d’ions de focalisation cryogénique (cryo-FIB), et l’acquisition parallèle symétrique en dose, produisant des lamelles uniformément fines et des échantillons vitrifiés pour une analyse in situ reproductible dans l’hippocampe de souris.

Flux de travail de la tomographie cryo-électronique pour tissus épais démontré dans l’hippocampe de souris

Apprenez les techniques de congélation rapide et de cryosectionnement du cerveau embryonnaire de souris E12.5. Cette méthode utilise l'OCT et le cryostat pour obtenir des coupes tissulaires de haute qualité sans fissures ni distorsions.

Flash de congélation et Cryosectioning E12.5 cerveau de souris

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