Injection orthotopique dans le coussinet adipeux mammaire : établissement du cancer du sein chez la souris

Tout d’abord, établissez la lignée cellulaire de cancer du sein souhaitée en culture. La veille de l’opération, rasez l’abdomen de la souris et utilisez une crème dépilatoire pour enlever le pelage et exposer les mamelons inguinaux. Le jour de l’opération, prélevez les cellules, anesthésiez la souris et confirmez une absence de réponse au pincement de l’orteil. À l’aide d’une pince à épiler, pincez la peau autour du mamelon pour créer un tunnel surélevé.

Ensuite, avec la seringue de cellules collectées, percez la peau. L’aiguille doit suivre le tunnel jusqu’à ce que la pointe se rapproche du mamelon. Déplacez doucement la pointe de l’aiguille vers le haut dans le coussinet adipeux mammaire, juste en dessous du mamelon. Retirez la pince à épiler pour former une tente cutanée avec l’aiguille, puis injectez lentement les cellules.

Enfin, rétractez la seringue en prenant soin de ne pas déranger la bosse ronde entourant le mamelon. Les cellules injectées et les tumeurs qui en résultent expriment la luciférase et peuvent être suivies à l’aide de l’imagerie bioluminescente. Dans l’exemple de protocole, nous montrerons l’établissement d’un cancer du sein orthotopique murin. La veille de l’opération, immobilisez manuellement la souris receveuse et retournez le ventre de l’animal vers le haut jusqu’à la fourrure à raser autour des quatrièmes mamelons.

Essuyez la fourrure avec une fine couche de crème dépilatoire. Utilisez de l’eau distillée pour retirer la crème après 30 à 60 secondes. Et séchez la souris avec des serviettes en papier douces. Le jour de l’opération, diluez la suspension de cellules cancéreuses du sein murines à 2 x 10 à 5 cellules par millilitre de concentration de PBS dans un tube de microcentrifugation stérile sur glace.

Avant chaque injection, chargez une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de .45 par 16, avec 50 microlitres de cellules par souris. Et confirment une absence de réponse au pincement des orteils chez chaque animal sous sédation. Appliquez de la pommade sur les yeux de l’animal et utilisez une pince à épiler pour fixer la peau autour du quatrième mamelon de la première souris afin de créer un tunnel pour la seringue à suivre.

Tenez la seringue avec le biseau vers le haut et pénétrez par voie sous-cutanée dans la peau à cinq à 10 millilitres du mamelon, en suivant le tunnel jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille atteigne presque le mamelon. - À l’aide d’une pince à épiler, la peau autour du premier mamelon crée un tunnel que la seringue peut suivre. L’aiguille doit être insérée entre les pointes de la pince à épiler et doit remonter, au lieu de s’enfoncer dans les tissus. Déplacez délicatement la pointe de l’aiguille vers le haut dans le coussinet adipeux mammaire jusqu’à ce que le biseau soit sous le mamelon.

Et relâchez la tente cutanée pour permettre une injection lente des cellules cancéreuses. - Lors de l’insertion, déplacez soigneusement la pointe de l’aiguille vers le haut dans le coussinet adipeux mammaire jusqu’à ce que le biseau soit sous le mamelon et que vous sentiez une résistance pour assurer la livraison des cellules au bon endroit. Lorsque toutes les cellules ont été injectées, tournez légèrement l’aiguille sur le côté et rétractez lentement la seringue. Utilisez un coton-tige pour appliquer une pression sur la plaie de l’aiguille pendant 10 à 20 secondes, afin de vous assurer qu’il n’y a pas d’infiltration de liquide.

Le mamelon injecté doit apparaître sous la forme d’une sphère plate blanche transparente, avec le mamelon au centre