0 vues • 5:15 min • April 30th, 2023
- Pour commencer, placez un poisson anesthésié côté ventral vers le haut dans une fente dans une éponge humide. Insérez l’électrode positive dans la ligne médiane du poisson au niveau de l’artériose bulbeuse. Ensuite, insérez l’électrode négative sous le ventricule et de 0,5 à 1 millimètre à gauche de la ligne médiane pour créer une sonde bipolaire à travers laquelle les différences de potentiel électrique peuvent être mesurées. Enfin, insérez l’électrode de référence près de la région anale pour mettre à la terre le signal électrique.
Commencez l’enregistrement et, après un court laps de temps, examinez le tracé pour vous assurer que quatre critères sont remplis. Toutes les formes d’onde doivent être visibles et distinctes les unes des autres. L’onde P, qui représente la dépolarisation auriculaire, doit être positive. La somme nette des ondes Q, R et S, qui représente la dépolarisation ventriculaire, doit être positive. Et enfin, l’onde T, qui représente la repolarisation auriculaire, doit être positive. Si les critères ne sont pas remplis, ajustez les électrodes jusqu’à ce qu’une trace appropriée soit enregistrée.
Après l’enregistrement, réveillez le poisson en le plongeant dans de l’eau oxygénée et en faisant gicler de l’eau sur les branchies jusqu’à ce que les branchies ou le poisson commencent à bouger régulièrement. Dans l’exemple, nous allons effectuer une électrocardiographie de surface sur un poisson-zèbre adulte.
- Le jour de l’expérience, transportez le poisson-zèbre de l’aquarium au laboratoire. Pour configurer le système d’enregistrement ECG in vivo, connectez les pièces essentielles de l’équipement et insérez les trois électrodes en acier inoxydable codées par couleur du fil ECG dans les trois portails d’accès de couleur assortie de l’amplificateur. Pour l’induction d’une anesthésie de niveau 4, immergez un poisson-zèbre adulte dans une boîte contenant une solution d’anesthésiques aux concentrations prédéterminées les plus basses approuvées par le Comité institutionnel de protection et d’utilisation des animaux.
Une fois que le poisson-zèbre a maintenu le niveau pour l’anesthésie pendant trois secondes, utilisez une paire de pinces émoussées pour transférer immédiatement le poisson sur une éponge humide avec une surface ventrale fendue vers le haut pour la mise en place des trois électrodes ECG. Insérez doucement l’électrode positive dans la ligne médiane ventrale au niveau de l’artériose bulbeuse 1 à 2 millimètres au-dessus d’une ligne imaginaire reliant les deux bords inférieurs des opercules.
Positionnez l’électrode négative dans le sens de la caudale et de 0,5 à 1 millimètre vers la gauche de l’électrode positive à une distance supérieure à la longueur apicale-basale maximale du ventricule du poisson-zèbre adulte. Ensuite, positionnez l’électrode de référence caudalement près de la région anale. Pour l’enregistrement ECG, démarrez le système et ouvrez le programme d’acquisition de données ECG. Sélectionnez le paramètre souhaité dans les menus déroulants pour la plage, le passe-bas et le passe-haut.
Appuyez sur Start pour lancer l’enregistrement ECG continu sans espace à une fréquence d’échantillonnage de 1 kilohertz. Pour optimiser le positionnement de la sonde afin d’obtenir un rapport signal/bruit maximal, appuyez sur stop pour arrêter l’enregistrement et révisez la trace peu de temps après la toute première tentative d’enregistrement pour chaque cœur. Si l’on s’attend à ce que l’ECG soit normal, confirmez que toutes les formes d’onde ECG sont distinctes et facilement visibles et que l’onde P, le complexe QRS net et l’onde T sont tous positifs.
- L’étape la plus critique est le positionnement de la sonde pour maximiser le rapport signal/bruit. Appliquez les quatre critères de validation après la toute première tentative d’enregistrement ECG pour chaque poisson afin d’obtenir un retour d’information correct.
- Si un ECG normal est attendu, repositionnez les électrodes si nécessaire jusqu’à ce que ces quatre critères de validation soient satisfaits. Si une onde T normale est attendue mais que l’onde T est trop petite, repositionnez les électrodes pour maximiser l’amplitude de l’onde T. Reprenez l’enregistrement ECG après avoir optimisé le positionnement de la sonde, en enregistrant les balayages ECG pour une analyse ultérieure.
À la fin de la séance d’enregistrement ECG, retirez soigneusement les électrodes sans blesser le poisson. Dans les études de survie, transférez le poisson dans de l’eau de poisson fraîche, oxygénée et exempte de tricaïne. Veuillez noter que dans cette vidéo, afin de faciliter le visionnage du poisson après l’anesthésie, l’oxygénation est interrompue.
Pour faciliter la récupération de l’anesthésie dans les études de survie, utilisez une pipette Pasteur pour verser vigoureusement de l’eau sur les branchies jusqu’à ce que le poisson reprenne le mouvement régulier des branchies ou nage. Ensuite, surveillez les poissons pour s’assurer qu’ils se rétablissent complètement de l’anesthésie avant de les remettre dans l’aquarium. Le poisson est considéré comme complètement rétabli de l’anesthésie lorsqu’il peut nager debout pendant au moins 5 secondes.