Extraction mécanique du chorion et de la membrane vitelline : une méthode pour préparer les ovocytes de drosophile à l’observation directe

- Commencez par des ovocytes matures d’ovaires fixes dans une solution saline. Les ovocytes matures portent des coquilles d’œufs composées d’un chorion externe et d’une membrane vitelline interne.

Pour retirer mécaniquement le chorion et la membrane vitelline, placez les ovocytes entre les parties givrées de deux lames prétraitées. Déplacez la glissière supérieure dans des mouvements droits d’avant en arrière pour créer une friction qui roule les ovocytes.

Maintenant, déplacez la glissière supérieure légèrement inclinée pour faire rouler les ovocytes dans une autre direction. En évitant les mouvements circulaires, augmentez cet angle par petits incréments jusqu’à ce que la glissière supérieure se déplace perpendiculairement à la glissière inférieure. Ce mouvement permet d’enlever mécaniquement les chorions et les membranes vitellines, permettant l’accès des sondes ou des taches dans l’ovocyte.

Les ovocytes sans chorions apparaîtront longs et minces, et ceux sans membranes vitellines auront des extrémités pointues. Pour séparer les ovocytes éliminés des débris environnants, transférez le mélange d’échantillons dans un tube et laissez les ovocytes se déposer vers le bas tandis que le