Drosophile In Vivo L’imagerie calcique : une méthode d’imagerie fonctionnelle de l’activité neuronale

- Pour réaliser une imagerie calcique in vivo dans le système nerveux de la drosophile, ciblez l’expression d’un indicateur calcique génétiquement codé, tel que GCaMP, vers les neurones d’intérêt. Lorsque les neurones déclenchent un potentiel d’action, la dépolarisation rapide de la membrane provoque l’ouverture de canaux calciques voltage-dépendants, entraînant un afflux de calcium extracellulaire dans la cellule.

GCaMP est une protéine de fusion dans laquelle la protéine fluorescente verte améliorée, ou EGFP, est modifiée et fusionnée avec le fragment M13 de la chaîne légère de la myosine à l’extrémité N-terminale, et avec la protéine de liaison au calcium, la calmoduline, à l’extrémité C-terminale. Le calcium se lie à la calmoduline, déclenche des changements de conformation dans le GCaMP, provoquant une augmentation de la fluorescence de la protéine.

Pour imager les changements de fluorescence de GCaMP en tant qu’indicateur de l’activité neuronale in vivo, exposez la région du système nerveux avec l’activité anticipée. Ensuite, utilisez un microscope fluorescent capable de capturer la dynamique du GCaMP et équipé d’une configuration de distribution de stimulus. Délivrer le stim