Irradiation UV : une méthode pour intégrer des réseaux extrachromosomiques

- La création de réseaux d’ADN extrachromosomiques par micro-injection - la méthode la plus simple pour générer des souches de vers transgéniques - permet d’obtenir des éléments génétiques qui ne sont pas transmis de manière stable pendant la division cellulaire et, par conséquent, présentent des taux d’hérédité et des niveaux d’expression variables. L’objectif de l’intégration de la puce dans un chromosome est de réduire cette instabilité et cette variabilité génétiques.

Pour ce faire, commencez par une population synchronisée par âge de vers transgéniques L4, qui portent un réseau extrachromosomique préalablement introduit par micro-injection et leur permettent de se transformer en adultes gravides. Transférez ces adultes dans de nouvelles assiettes et laissez-les pondre des œufs jusqu’à ce qu’il y ait au moins 30 œufs dans chaque assiette. Retirez les adultes et laissez les œufs grandir jusqu’à ce qu’ils atteignent le stade L4. Ensuite, irradiez les vers avec de la lumière UV. Cela provoque des cassures aléatoires double brin dans l’ADN génomique où la machinerie de réparation de l’ADN des vers peut incorporer arbitrairement le réseau.

Après une période de récupération d’une nui