Escape Response Assay : Une méthode pour étudier la réponse des larves de poisson-zèbre aux stimuli tactiles

- Pour commencer, transférez doucement quelques embryons dans une boîte de Pétri contenant un milieu embryonnaire. Tenez maintenant le chorion avec une pince et faites-y une déchirure avec une autre pince.

Ensuite, poussez doucement l’embryon à travers la déchirure. L’ablation du chorion de l’embryon accélère sa croissance et son mouvement. Pour vous débarrasser des débris, transférez les embryons dans une autre boîte de Pétri contenant un milieu embryonnaire à l’aide d’une pipette Pasteur.

Placez la boîte de Pétri dans un incubateur et laissez les embryons se développer à 28 degrés Celsius. Réglez la platine d’un microscope éclairé rempli d’eau à 28 degrés Celsius avant l’expérience pour éviter tout écart lié à la température dans le comportement des larves.

Placez la boîte de Pétri sur la scène et montez-la dans la caméra au-dessus de la parabole. Ensuite, centrez l'embryon dans le champ de vision de la caméra. Touchez maintenant doucement l’embryon avec une aiguille émoussée et enregistrez la réponse larvaire sur le logiciel d’enregistrement de la caméra vidéo.

Lors du stimulus, l’embryon présente une puissante réponse d’évasion - une nage en rafale accompagnée de virages brusques. Mesurez le temps entre le contact et l'accélération maximale de la larve lors de sa fuite.

Dans l’exemple de protocole, nous observerons la réponse des larves de poisson-zèbre à des stimuli externes.

- Pour effectuer le test, placez une boîte de Pétri remplie d’environ 25 millilitres de milieu embryonnaire sur une scène éclairée à température contrôlée réglée à environ 28 degrés Celsius. Montez la caméra haute vitesse au-dessus de l’antenne. Lancez le logiciel d’enregistrement vidéo et réglez la vitesse de capture sur 1 000 images par seconde pour garantir des vitesses de nage rapides.

Positionnez l’embryon au centre de la boîte de Pétri, bien visible dans le champ de vision. Appuyez sur enregistrement, puis délivrez un stimulus mécanosensoriel en touchant doucement l’embryon avec une aiguille émoussée sur le dessus de la tête.

Arrêtez l’enregistrement une fois que l’embryon a nagé hors du champ de vision ou qu’il est retourné au repos.

- Des tests répétés sur les mêmes larves peuvent entraîner une accoutumance ou favoriser une faiblesse musculaire dans certains modèles de maladie, entraînant une réponse réduite au stimulus tactile. Par conséquent, chaque embryon ne doit être testé qu’une seule fois.