Essai d’évitement et de thigmotaxie chez le poisson-zèbre : une méthode à haut débit pour examiner le comportement larvaire en réponse à un stimulus visuel aversif

- Pour commencer, placez cinq larves dans chaque voie d’une plaque d’agarose à six voies. Ajoutez de l'eau d'œuf supplémentaire, mais ne remplissez pas trop les allées. L’eau de l’œuf contient du bleu de méthylène, qui empêche la croissance de moisissures. Laissez les larves s’acclimater pendant au moins 10 minutes pour réduire leur stress.

Placez maintenant la plaque de puits dans une chambre d’imagerie au-dessus d’un écran d’ordinateur portable. Focalisez l’appareil photo sur la plaque du puits. Remplissez complètement la ruelle avec de l’eau d’œuf.

Ensuite, enregistrez le comportement des larves placées sur le fond blanc en prenant des images en accéléré. Affichez une barre rouge mobile sur l’écran de l’ordinateur portable et prenez des images en accéléré des larves en réponse à la barre rouge en mouvement.

La forme rouge est perçue comme une menace, un stimulus aversif, et provoque un stress chez les larves. En réponse, ils évitent la barre et présentent une thigmotaxie positive. La thigmotaxie positive est la réponse du poisson au stimulus : chercher le contact avec la paroi et nager au bord de la voie.

Dans l’exemple de protocole, nous analyserons les réponses d’évitement et thigmotactiques des larves de poisson-zèbre traitées avec des composés pharmaceutiques ou des toxines environnementales.

- Pour commencer la capture d’image, déplacez soigneusement les larves de la boîte de Pétri vers la voie d’agarose pour aider à réduire le stress des larves. Jusqu’à 20 larves peuvent être placées dans chaque couloir, mais cinq larves par couloir sont généralement utilisées pour faciliter le suivi le plus précis de la vitesse de nage et pour réduire le nombre de larves nécessaires par expérience.

Remplissez les couloirs d’eau d’œuf avec ou sans produits pharmaceutiques ou toxiques selon l’expérience. Ne remplissez pas complètement les voies avant qu’elles ne soient placées dans les armoires d’imagerie pour éviter tout débordement. Attendez 10 minutes pour que les larves s’acclimatent. Après la période d’acclimatation, placez quatre plaques à la main directement sur l’écran de l’ordinateur portable.

À ce stade, les voies peuvent être complétées avec de l’eau d’œuf ou un traitement chimique afin qu’elles soient au niveau du haut de la voie, afin d’éliminer les ombres sur les bords des voies dans les images.

Programmez l’ordinateur pour la photographie en accéléré, en prenant des photos toutes les six secondes pour un total de 300 images par expérience. Réglez l’appareil photo à une résolution inférieure pour l’imagerie à la vitesse de la vidéo. Bien que la résolution inférieure limite les enregistrements à une seule plaque multi-puits, les enregistrements vidéo conviennent à l’imagerie d’événements de nage rapide.

Utilisez une présentation PowerPoint comme stimulus aversif pour les larves. Dans cette démonstration, le PowerPoint commence avec un fond blanc vierge pendant 15 minutes, suivi d’une barre rouge mobile sur la moitié supérieure de la plaque pendant 15 minutes. Pour éviter l’évaporation du liquide à l’intérieur des voies d’agarose, maintenez le temps d’imagerie maximal à moins d’une heure.