Ablation ciblée du foie : induire la mort des hépatocytes avec du métronidazole chez des larves de poisson-zèbre transgénique

- Dissoudre le métronidazole dans de l’eau d’œuf contenant du DMSO, un solvant, et ajouter de la phénylthiourée, qui empêche la formation de pigments dans les embryons. Transférez quelques larves de l’âge approprié dans des plaques de traitement et de contrôle. Ensuite, ajoutez la concentration souhaitée de la solution de métronidazole sur la plaque d’essai et de l’eau d’œuf contenant du DMSO sur la plaque de contrôle.

Laissez les larves dans les deux plaques croître à 28 degrés Celsius. Les larves transgéniques produisent de la nitroréductase uniquement dans les hépatocytes, ce qui convertit le métronidazole en un médicament cytotoxique, entraînant la mort des hépatocytes ciblés. Après le traitement, retirez la solution de métronidazole de la plaque de traitement et lavez les embryons avec de l’eau d’œuf.

Ajoutez de la tricaïne pour anesthésier les larves et examinez-les au microscope à épifluorescence pour détecter une ablation sévère des hépatocytes - la destruction des cellules hépatiques. Vous observerez un foie beaucoup plus petit chez les individus traités que chez les individus du groupe témoin. Dans l’exemple de protocole, nous utiliserons le métronidazole pour l’ablation