Extraction d’ADN à partir d’un clip de queue : une méthode utilisée dans le génotypage du poisson-zèbre

- Commencez la procédure en plaçant un poisson adulte anesthésié sur une pile de papier absorbant. Utilisez maintenant une lame de rasoir stérile pour couper la nageoire caudale et transférez rapidement le poisson dans un réservoir contenant de l’eau douce pour la récupération. Transférez le clip de queue dans un tube propre contenant un tampon de lyse. Le tampon de lyse contient des détergents non ioniques, qui solubilisent la membrane plasmique et la membrane nucléaire d’une cellule. Le tampon contient également une enzyme appelée protéinase K qui décompose les protéines et permet la libération d’ADN dans le lysat. Il dégrade également les nucléases, protégeant l’ADN de la digestion des nucléases.

Maintenant, laissez les tubes avec les clips de queue dans un incubateur pendant la nuit pour décomposer complètement le tissu à 55 degrés Celsius avec une rotation continue. Ensuite, chauffez le tube à 95 degrés Celsius pendant 15 minutes pour inactiver la protéinase K. Centrifugez le tube pour granuler le matériau non digéré et transférez le surnageant contenant de l’ADN dans un autre tube. Ajoutez de l’alcool pour précipiter l’ADN et centrifugez-le à nouveau pour recueillir l’ADN dan