Préparation d’échantillons de microscopie à feuillet de lumière : montage d’embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme

- Tout d’abord, préparez l’agarose en ajoutant un milieu E3, qui fournit du calcium aux embryons déchorionnés à l’agarose fondue. Ensuite, ajoutez MS222 pour anesthésier les embryons. Refroidissez le mélange d’agarose à 38 degrés Celsius, près de se solidifier. Sélectionnez quelques embryons déchorionnés exprimant des protéines fluorescentes et transférez-les dans le mélange d’agarose.

Ensuite, insérez complètement un piston dans un capillaire en verre et aspirez un embryon, en vous assurant qu’il entre la tête la première. Une fois que l’agarose s’est solidifiée, utilisez du ruban adhésif pour maintenir le capillaire à la verticale dans un bécher contenant du milieu E3. Le fond capillaire ouvert favorise l’échange gazeux pour l’échantillon d’embryon.

Placez le capillaire dans le porte-échantillon d’un microscope à fluorescence à feuillet de lumière. Le laser forme une fine feuille de lumière, permettant à un objectif de détection, positionné perpendiculairement à l’échantillon, de capturer une image en coupe transversale. Dans l’exemple de protocole, nous monterons des embryons de poisson-zèbre pour imager l’œil en développement.

Commencez par préparer l’agarose. Faites fondre une