Montage de gélose en couches : préparation d’embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme avec un microscope inversé

- Commencez par une boîte de Pétri contenant des embryons dans un milieu E3. Ajoutez de la tricaïne pour anesthésier les embryons et de la phénylthiourie, une solution de PTU, pour inhiber la formation de pigments. À l’aide d’un microscope de dissection, déchorionnez les embryons.

À l’aide d’une pipette en verre, transférez l’un des embryons déchoionnés dans une petite boîte de Pétri avec un fond en verre peu profond bien au centre et retirez l’excédent de milieu. Ensuite, placez une solution d’agarose à une concentration optimale pour minimiser la distorsion et la motilité de l’embryon dans un tube à microfuge et chauffez-le. Abaissez la température à 30 degrés Celsius pour éviter d’endommager l’embryon à cause de la chaleur.

Versez la première couche d’agarose sur l’embryon, en remplissant complètement le puits peu profond. Placez un autre verre de couverture sur le puits et ajoutez 1 % d’agarose par-dessus. La deuxième couche maintient le verre de protection en place.

Une fois que l’agarose se solidifie, remplissez la boîte de Pétri avec le milieu E3 contenant de la tricaïne. Il s’agit de la troisième couche qui maintient l’agarose et l’embryon hydratés. Dans le protocole suivan