L’axotomie laser à deux photons : une méthode pour endommager les axones chez les embryons de poisson-zèbre et observer la récupération axonale

- Placez les embryons d'intérêt dans la solution de Ringer pour inhiber la formation de pigments, qui commence 24 heures après la fécondation. Cela rend l’anatomie en développement plus visible, ce qui est nécessaire pour cette procédure. Transférez un embryon anesthésié à la tricaïne dans une chambre d’imagerie. Placez une lame de verre sur le dessus et observez-la sous votre microscope. Focus sur l’axone à blesser, qui est visible sous un laser de 488 nanomètres car il exprime transgéniquement la GFP.

Prenez une image avant du site. Ensuite, observez l’axone avec un laser de 910 nanomètres qui fait que la GFP devient fluorescente en rouge. Augmentez l’intensité de ce laser pour blesser la zone cible sans affecter les tissus environnants. Ce processus s’appelle l’axotomie. Prenez une nouvelle image avec le premier laser pour confirmer l’axotomie, qui apparaît sous forme de débris dispersés. Dans le protocole suivant, nous effectuerons une axotomie des axones sensoriels périphériques dans des embryons de poisson-zèbre à l’aide d’un laser à deux photons.

- Si un microscope à deux photons personnalisé n’est pas disponible dans votre laboratoire, le microscope confocal à deux photons