0 vues • 3:14 min • April 30th, 2023
- L’œil d’un poisson-zèbre comprend la cornée, la sclère, le cristallin et la rétine. La cornée est un tissu transparent qui permet à la lumière de pénétrer dans l’œil. La sclérotique est un tissu opaque qui est en continuité avec la cornée, formant une couche protectrice externe. Le cristallin est une structure sphérique qui concentre la lumière sur la rétine, qui est une couche de tissu sensible à la lumière qui convertit la lumière en un signal neuronal.
Pour disséquer l’œil, remplissez une boîte de Pétri de silicone et laissez-la prendre. Maintenant, placez un poisson anesthésié dans le plat et excisez les yeux à l’aide d’un micro-ciseau. Transférez les yeux dans une plaque remplie de PBS pour maintenir un pH constant dans le tissu et orientez l’œil avec la face postérieure vers le haut. Tenez l’œil avec une pince et faites soigneusement trois incisions radiales à travers la sclérotique et la rétine.
Ensuite, pliez le tissu pour révéler le cristallin. Maintenant, positionnez l’œil avec la face antérieure vers le haut et retirez la sclérotique et la rétine. Retirez le cristallin de l’œil disséqué et retirez tout tissu restant autour de celui-ci. Dans le protocole suivant, nous effectuerons des dissections de lentilles de poissons-zèbres larvaires et adultes pour analyser la morphologie du cristallin.
Après confirmation d’une sédation suffisante avec de la tricaïne, utilisez des ciseaux de microdissection pour exciser immédiatement les deux yeux d’un poisson-zèbre adulte ou larvaire, et placez les deux yeux dans une boîte de Pétri de 35 millimètres faite sur mesure avec un moule de dissection en silicone rempli de PBS. Pour récolter le cristallin d’un poisson-zèbre adulte, placez l’œil côté postérieur vers le haut et insérez une pince à un angle inférieur à 45 degrés à travers le disque optique. Utilisez des ciseaux de dissection pour faire deux ou trois incisions radiales à travers la rétine et la sclérotique du disque optique à la zone ciliaire de l’œil immobilisé et décollez la rétine et la sclérotique comme des pétales de fleur. Inversez l’œil, côté cornée vers le haut, et utilisez le côté plat des ciseaux pour immobiliser le cristallin indirectement en manipulant la sclérotique et la cornée tout en utilisant des pinces pour retirer la rétine et les tissus attachés. Ensuite, coupez soigneusement tout excès de tissu de l’objectif.
Pour la récolte de lentille de poisson-zèbre larvaire, joue un œil de larve côté postérieur vers le haut sur la partie plate d’un plat en silicone de PBS. Et utilisez une aiguille en tungstène aiguisée pour faire des coupures radio à travers la rétine et la sclérotique tout en immobilisant l’œil avec une autre aiguille ou une pince. Ensuite, retirez doucement la lentille de l’œil dissocié avec le côté émoussé d’une aiguille en fil de tungstène sur mesure et retirez soigneusement le tissu attaché.