JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 2:05 min • April 30th, 2023
- Tout d’abord, placez un poisson anesthésié avec la face dorsale vers le haut dans une éponge pré-mouillée. Avant l’électroporation, injectez du matériel génétique dans le tissu cible, dans ce cas, une partie du cerveau antérieur appelée télencéphale. Ensuite, mettez une petite quantité de gel à ultrasons sur la tête. Appliquez également le gel sur la pointe des électrodes pour faciliter un fonctionnement efficace. Placez l’électrode positive sur la face ventrale de la tête et l’électrode négative sur la face dorsale.
Maintenant, appuyez doucement les électrodes contre la tête et administrez plusieurs impulsions de courant électrique. Le courant crée des pores temporaires dans la membrane plasmique des cellules électroporées et les rend perméables. Le courant facilite également le mouvement des particules chargées négativement, telles que les plasmides d’expression de l’ADN ou les oligonucléotides ARNi présents dans l’environnement, dans les cellules. Dans l’exemple suivant, nous allons utiliser l’électroporation pour introduire un plasmide recombinant dans des cellules épendymogliales, cellules souches responsables de la génération de nouveaux neurones.
- Couvrez le télencéphale de poisson avec une petite quantité de gel à ultrasons. Pour l’électroporation de l’animal injecté dans le plasmide, retirez l’éponge de la configuration d’éjection et plongez la face intérieure des pointes d’électrode dans du gel à ultrasons. Positionnez la tête de poisson entre les électrodes, avec l’électrode positive sur le côté ventral de la tête et l’électrode négative sur le côté dorsal. Ensuite, tout en tenant toujours le corps du poisson dans l'éponge, appuyez doucement et précisément les électrodes contre le télencéphale et administrez le courant avec la pédale, en maintenant les électrodes en place jusqu'à ce que les cinq impulsions soient terminées.