0 vues • 2:47 min • April 30th, 2023
- Transférez un poisson anesthésié à la tricaïne sur une éponge humide avec la face dorsale vers le haut. Placez l’éponge portant le poisson sous un microscope. Positionnez une aiguille de micro-injection à un angle de 45 degrés par rapport à l’axe du corps, près du muscle dorsal.
Ensuite, localisez l’endroit devant la nageoire dorsale qui n’est pas recouvert d’écailles où vous pouvez insérer l’aiguille sans appliquer une grande force. Ensuite, insérez doucement l’aiguille et injectez lentement le composé d’intérêt avec un marqueur tel que le rouge de phénol dans le muscle.
Si le composé d’intérêt contient du matériel génétique, électroporatez les cellules en plaçant des électrodes de chaque côté du site d’injection et en administrant le courant. Le courant rend les cellules musculaires perméables et capables d’absorber efficacement le matériel génétique. Après la procédure, transférez immédiatement le poisson dans un réservoir de récupération. Dans le protocole suivant, nous effectuerons une injection intramusculaire sur un poisson-zèbre adulte pour administrer un vaccin à ADN contre la mycobactériose.
Pour maintenir le poisson dans une position fixe pendant l’injection, utilisez un morceau d’éponge avec une rainure découpée au milieu comme rembourrage. Trempez soigneusement l’éponge dans l’eau du système et placez-la dans une boîte de Pétri. À l'aide d'une cuillère en plastique, transférez un poisson-zèbre anesthésié dans l'éponge humide avec le côté ventral du poisson vers le bas dans le sillon. Sous le microscope, placez l'aiguille à un angle de 45 degrés près du muscle dorsal du poisson-zèbre. Trouvez ensuite le petit endroit sans écailles devant la nageoire dorsale et enfoncez l’aiguille dans le muscle.
Si une résistance se fait sentir, essayez un endroit adjacent. À l’aide d’un interrupteur au pied, injectez progressivement la solution plasmidique dans le muscle. Au microscope, le rouge de phénol doit être visible lorsqu’il pénètre dans le tissu musculaire.
Électroporez le poisson immédiatement après l’injection en plaçant les électrodes de type pince à épiler de chaque côté du site d’injection. Appuyez sur le bouton de démarrage de l’électroporateur et donnez-lui six impulsions de 40 volts, 50 millisecondes. Transférez ensuite délicatement le poisson dans un réservoir de récupération. Enfin, après avoir anesthésié le poisson selon le protocole textuel, utilisez une lumière UV pour voir l’expression de l’EGFP près du site d’injection.