Microinjection d’embryons : une technique pour délivrer un composé dans le jaune de poisson-zèbre

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biologie

0 vues • 3:58 min • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Placez deux poissons femelles et deux poissons mâles dans un réservoir d’élevage divisé une nuit avant l’injection. Le lendemain matin, retirez le séparateur et laissez les poissons se reproduire jusqu’à ce que vous observiez des œufs au fond de l’aquarium. Récupérez les œufs et lavez-les avec un milieu E3 contenant du bleu de méthylène, un fongicide. Observez les œufs au microscope et retirez les œufs non fécondés. Les œufs non fécondés ont une membrane vitelline transparente, tandis que les œufs fécondés ont une membrane jaune foncée.

Conservez 10 embryons dans une boîte de Pétri séparée en tant que témoins non injectés. À l’aide d’une pipette de transfert, alignez les embryons dans l’auge d’une plaque de micro-injection à température ambiante et placez-la sous le microscope. Poussez doucement l’aiguille de micro-injection à travers le chorion dans le jaune et injectez lentement un composé d’intérêt contenant un marqueur tel que le rouge de phénol. Le flux cytoplasmique permet au composé de se diffuser dans les cellules embryonnaires.

Après l’injection, cultivez les embryons dans un milieu E3 avec du bleu de méthylène à 28 degrés Celsius. Continuez à vérifier la santé des embryons. Retirez tous les embryons morts ou en développement anormal et changez le milieu tous les jours. Dans le protocole suivant, nous utiliserons la micro-injection pour délivrer une ribonucléoprotéine, ou complexe RNP, dans des embryons de poisson-zèbre.

- Tout d’abord, préparez les sujets de poisson-zèbre pour la reproduction la nuit précédant la réalisation des injections comme décrit dans le protocole de texte. Combinez ensuite la protéine Cas9 et l’ARNsg dans un rapport de deux pour un. Incuber la solution à température ambiante pendant cinq minutes pendant que le Cas9 et l’ARNsg forment un complexe ribonucléoprotéique. Ajoutez ensuite 0,5 microlitre de solutions de rouge de phénol à 2,5 % dans suffisamment d’eau libre de RNase pour obtenir un volume final de cinq microlitres.

Pour préparer l’aiguille d’injection, utilisez un extracteur de micropipette pour tirer un capillaire en verre d’un millimètre. Coupez ensuite la pointe de l’aiguille de verre obtenue avec une lame de rasoir pour obtenir une ouverture inclinée. Placez l’aiguille dans un micromanipulateur attaché à un micro-injecteur. À l’aide d’un microscope optique, ajustez la pression d’injection jusqu’à ce que l’aiguille injecte systématiquement un nanolitre de solution dans la boîte de Pétri.

- Avant d’effectuer une micro-injection d’embryons, entraînez-vous à préparer des aiguilles et à injecter des embryons témoins à l’aide d’une solution de colorant uniquement et enregistrez la survie après 24 heures de développement. Vous devriez être en mesure d’obtenir un taux de survie supérieur à 90 % par rapport à un témoin non injecté.

- Ensuite, sélectionnez 10 à 15 embryons comme population témoin et placez-les dans une boîte de Pétri étiquetée séparément. À l’aide d’une pipette de transfert, alignez soigneusement les embryons restants sur une plaque d’injection à température ambiante. Sous un microscope de dissection, injectez un nanolitre de la solution dans le sac vitellin de chaque embryon. Ensuite, retournez les embryons injectés dans une boîte de Pétri étiquetée et recouvrez-les d’un milieu 1X E3 avec du bleu de méthylène. Placez les embryons injectés dans un incubateur à 28 degrés Celsius pendant 24 heures. Ensuite, inspectez les embryons injectés pour retirer les individus morts ou en développement anormal.

15:55

Microinjections intraveineuse de larves de poisson zèbre pour étudier lésions rénales aiguës

Vidéos connexes

0 Vues

11:18

L'infection des embryons de poisson zèbre avec bactéries pathogènes intracellulaires

Vidéos connexes

0 Vues

09:56

Modèle de xénogreffe hétérogène dérivé par le patient du cancer du pancréas à l'aide de larves de poisson zèbre comme hôtes pour l'évaluation comparative des médicaments

Vidéos connexes

0 Vues

11:33

Microinjection d'ARNm et oligonucléotides antisens morpholino dans embryons de poissons zèbres.

Vidéos connexes

0 Vues

07:18

Microinjection d'embryons de poissons zèbres pour analyser la fonction génique

Vidéos connexes

0 Vues

07:25

Microinjection d'embryons Medaka pour être utilisé comme un organisme modèle génétique

Vidéos connexes

0 Vues

12:40

À haut débit microinjections oursins zygotes

Vidéos connexes

0 Vues

08:48

Une méthode pour micro-injection de Patiria minata zygotes

Vidéos connexes

0 Vues

05:54

Microbead implantation dans l'embryon de poisson zèbre

Vidéos connexes

0 Vues

10:05

Analyse des Zebrafish Kidney Development avec Time-lapse d'imagerie utilisant un microscope à dissection équipé pour sectionner optique

Vidéos connexes

0 Vues

Dernière mise à jour : 22 août 2026