Injection intrathoracique : administration composée au cœur du poisson-zèbre adulte

- Pour commencer, placez une éponge humide avec une fente sur une boîte de Pétri. Ensuite, anesthésiez un poisson adulte avec une solution de tricaïne et transférez-le soigneusement dans la fente avec la face ventrale vers le haut. Placez la boîte de Pétri sous un stéréomicroscope et observez le mouvement du cœur qui bat sous la peau.

Positionnez une aiguille de mincroinjection à un angle de 45 degrés par rapport à l’axe du corps au-dessus du cœur battant situé entre l’opercule et la ceinture pectorale. Doucement, faites passer l’aiguille à travers la peau jusqu’au péricarde, une fine membrane qui entoure le cœur. Administrer le mélange d’injection dans le péricarde.

Le shot contient un colorant traçant tel que le rouge de phénol pour suivre le mouvement de la solution. Retirez l’aiguille du thorax. Transférez immédiatement le poisson dans le réservoir de récupération contenant l’eau du système et surveillez-le pour s’assurer qu’il se remet complètement de l’anesthésie. Dans le protocole suivant, nous effectuerons une injection intrathoracique pour délivrer un composé test et examinerons ses effets sur la régénération cardiaque.

- Utilisez un filet pour attraper un poisson adulte et transférez-le dans la solution anesthésique. Après une à deux minutes, lorsque le poisson cesse de nager et que le mouvement de l’opercule est réduit, touchez le poisson avec une cuillère en plastique pour vous assurer qu’il ne réagit à aucun contact. Ensuite, transférez rapidement et soigneusement le poisson dans la rainure de l’éponge humide avec le côté ventral vers le haut. La tête du poisson doit être dirigée à l'opposé de la main dominante de l'opérateur.

Au stéréomicroscope, observez attentivement le mouvement du cœur qui bat sous la peau du poisson. Visuellement, déterminez le point d’injection au-dessus du cœur battant et au milieu du triangle défini par les plaques cartilagineuses ventrales. Insérez l’extrémité du capillaire à un angle compris entre 30 et 45 degrés par rapport à l’axe du corps. Pénètre doucement la peau avec l’extrémité du microcapillaire dans le péricarde.

Une fois que l’aiguille est à l’intérieur du péricarde, appuyez sur la pédale du dispositif de micro-injecteur pour terminer l’injection. Après l’injection, retirez doucement le capillaire du thorax et transférez immédiatement le poisson dans un réservoir avec de l’eau système pour la récupération. Surveillez les poissons jusqu’à ce qu’ils se remettent complètement de l’anesthésie. Pour analyser les effets de l’injection, prélevez le cœur au moment souhaité et préparez-le pour une analyse plus approfondie.