0 vues • 3:21 min • April 30th, 2023
- Une xénogreffe est un organe ou un tissu prélevé sur une espèce et transplanté dans une autre. Une xénogreffe dérivée d'un patient, ou PDX, est un modèle de cancer dans lequel le tissu de la tumeur d'un patient est implanté dans un animal immunodéficient, tel qu'une larve de poisson-zèbre dont le système immunitaire n'est pas complètement développé, pour étudier la progression de la tumeur ou l'efficacité des médicaments. Tout d’abord, anesthésie les larves 48 heures après la fécondation dans une solution de tricaïne et transfère une larve dans une plaque d’injection contenant de l’agarose fabriquée avec un milieu E3.
Ensuite, chargez la suspension des cellules du greffon du patient et transférez-la dans une aiguille microcapillaire. Au microscope, injectez les cellules dans le sac vitellin de la larve à l'aide d'une aiguille microcapillaire. Maintenant, cultivez les larves injectées dans une solution E3 contenant du glucose et de la L-glutamine, qui soutient les besoins énergétiques élevés des cellules xénogreffées.
Pour le traitement médicamenteux, transférez les larves xénogreffées dans une plaque de puits, divisez les puits en groupes en fonction du nombre et des doses de composés à tester, et ajoutez les composés. Incluez un groupe témoin. Incuber les larves traitées à 32 degrés Celsius avant d’observer les résultats du traitement.
Dans le protocole suivant, nous étudierons les médicaments gemcitabine et navitoclax dans un modèle zPDX du cancer du pancréas.
- Après avoir anesthésié les larves de poisson-zèbre, transférez-les dans la plaque d’injection, qui est remplie d’E3 modifié. Prélevez 25 microlitres de la suspension à cellules mixtes dans l’aiguille microcapillaire et insérez l’aiguille dans le manipulateur de micro-injection. Réglez la pression et le temps d’injection, et injectez 50 à 80 cellules dans le sac vitellin du poisson-zèbre 48 heures après la fécondation.
Transférez les larves de poisson-zèbre post-xénogreffées dans 40 millilitres de solution mélangée à 32 degrés Celsius. Placez 10 larves xénogreffées dans chaque puits d’une plaque de 12 puits. Ensuite, divisez les larves en quatre groupes.
Traitez le groupe témoin avec de l’E3 contenant 0,1 % de DMSO, et traitez les autres groupes avec de la gemcitabine et/ou du navitoclax. Incuber toutes les larves à 32 degrés Celsius pendant deux jours. Après avoir anesthésié les larves xénogreffées après le traitement, placez-les dans 3 % de méthylcellulose.
Utilisez un microscope à fluorescence ou un microscope confocal pour imager les larves à partir de la vue latérale. Ensuite, utilisez les logiciels Image J et Graph Pad pour quantifier l’intensité des signaux fluorescents rouges et verts.