0 vues • 3:54 min • April 30th, 2023
- Placez un poisson euthanasié sur un lit de dissection et utilisez une lame chirurgicale pour décapiter le poisson au niveau des branchies. Tenez la tête avec la face ventrale vers le haut et retirez les tissus mous jusqu’à ce que vous voyiez le chiasma optique, une structure faite de nerfs optiques qui relie le cerveau aux yeux.
Coupez les nerfs optiques et retirez les yeux. Maintenant, orientez le poisson avec la face dorsale vers le haut et retirez les parties du crâne pour isoler le cerveau. Transférez le cerveau dans une boîte de Pétri contenant un milieu de dissection pour maintenir un pH constant du tissu. Observez les parties du cerveau.
Les bulbes olfactifs sont une paire de structures à l’extrémité antérieure reliées aux organes olfactifs qui détectent les signaux olfactifs. Le télencéphale comprend des zones liées à la mémoire. L’habenula relaie l’information du télencéphale à d’autres parties du cerveau.
Le tectum optique est un centre de traitement de l’information sensorielle. Le cervelet joue un rôle dans la fonction motrice somatique et l’équilibre. Et la moelle transmet l’information de la moelle épinière au cerveau. Dans le protocole suivant, nous isolerons le cerveau d’un poisson-zèbre adulte pour collecter des cellules souches neurales de différentes régions.
Pour commencer, préparez un lit de dissection en remplissant une boîte de Pétri avec des packs de gel. Couvrez ensuite le plat avec son couvercle correspondant et incubez-le à moins 20 degrés Celsius. Une fois le gel congelé, sortez le plat du congélateur et placez un carré propre de papier filtre sur son couvercle. Procédez à l’emballage du papier et du plat avec un film plastique.
Ensuite, traitez tous les instruments de micro-dissection avec de l’éthanol à 70 %. Placez ces outils stérilisés à côté d’un microscope de dissection et placez le lit de dissection terminé sous le microscope avec un éclairage par fibre optique. Placez immédiatement un échantillon de tête préalablement préparé sur le lit de dissection et orientez-le de manière à ce que sa face dorsale soit tournée vers le bas.
Ensuite, à l’aide de ciseaux, faites une coupe longitudinale à travers les tissus mous de l’arrière de la tête à la bouche. Ensuite, exposez la base du crâne avec une pince et retirez tous les tissus adjacents. Ensuite, coupez l’une des parois latérales du crâne en commençant à l’arrière de la tête et en se déplaçant vers la région du tectum du cerveau. Répétez ce processus pour le côté controlatéral. Procédez à la coupe du nerf optique. Et puis retirez les deux côtés les plus latéraux du crâne au niveau du tectum
Enfin, tournez la tête ventrale vers le haut. Et à l’aide d’une pince, décollez la partie la plus apicale du crâne pour exposer le cerveau. Ensuite, transférez le cerveau et toutes les parties restantes du crâne dans une boîte contenant un milieu de dissection composé de DMM F12 complété par de la pénicilline streptomycine. Avec le manche en plastique d’un microcouteau sous le microscope, nettoyez le tissu cérébral en faisant attention de ne pas endommager les structures neurales. Utilisez jusqu’à deux cerveaux de poisson-zèbre pour générer des neurosphères entières dérivées du cerveau.