0 vues • 4:47 min • April 30th, 2023
- La cardiomyopathie est une affection dans laquelle le muscle cardiaque s’affaiblit et perd la capacité de pomper le sang. Cette condition peut être reproduite chez le poisson zèbre. Tout d'abord, diluez une solution mère d'un médicament responsable de la cardiotoxicité dans la solution saline équilibrée de Hanks pour préparer plusieurs concentrations de travail. Ensuite, placez un poisson anesthésié au tricaïne, face ventrale vers le haut, sur une éponge de maintien sous un microscope à dissection. Positionnez l’aiguille entre les nageoires pelviennes à un angle de 45 degrés par rapport à l’horizontale.
Maintenant, enfoncez doucement l’aiguille de 1 à 2 millimètres dans la cavité péritonéale et injectez lentement la solution médicamenteuse. Attendez cinq secondes avant de retirer l’aiguille pour éviter que la solution ne s’échappe. Transférez immédiatement le poisson dans un réservoir propre contenant de l’eau fraîche du système. Enregistrez le nombre de poissons qui meurent chaque jour en raison d’une cardiotoxicité sévère ou de dommages au muscle cardiaque. Le médicament se lie aux récepteurs de mort présents sur la membrane cellulaire des cardiomyocytes et déclenche l’apoptose, entraînant une cardiotoxicité sévère.
Créez une courbe de survie, un graphique affichant la probabilité de survie dans le temps pour chaque concentration de médicament. Dans l’exemple, nous allons injecter de la doxorubicine, ou DOX, pour induire une cardiomyopathie chez un poisson-zèbre adulte de deux manières.
Avant d’injecter du DOX au poisson, faites jeûner le poisson pendant 24 heures. Ensuite, regroupez les poissons. Pendant l’anesthésie, utilisez un papier filtre propre pour sécher chaque poisson et mesurez son poids corporel. Faites des groupes de poissons qui sont tous à moins de 10 % du même poids corporel afin que chaque groupe puisse recevoir la même dose de DOX. Ensuite, calculez la concentration de travail de DOX pour chaque groupe de sorte que chaque groupe soit injecté avec cinq microlitres de solution et reçoive la même dose de DOX en poids corporel.
Ensuite, diluez le stock de DOX dans 1x HBSS. Mélangez la dilution avec un vortex, puis faites tourner la dilution par impulsions pour la maintenir concentrée dans le tube. Pour l’injection, préparez une plateforme d’injection. Dans une boîte de Pétri propre de 100 millimètres, placez une éponge. À l’aide d’un microscope de dissection, découpez une cavité dans l’éponge pour retenir un poisson, quatre centimètres fonctionnent habituellement.
Ensuite, sur une aiguille de calibre 34, fixez une microseringue de 10 microlitres. Ensuite, rincez l’aiguille avec 1x HBSS pour éliminer les bulles ou les blocages de la seringue et de la tubulure. Maintenant, anesthésez brièvement le poisson adulte avec de la tricaïne. Ensuite, trempez l’éponge dans l’eau de l’embryon avec de la tricaïne et transférez un poisson sur l’éponge avec son abdomen vers le haut pour l’injection. Maintenant, injectez par voie intrapéritonéale la solution DOX en insérant rapidement l’aiguille à un angle de 45 degrés dans la ligne médiane entre les nageoires pelviennes à environ 1 à 2 millimètres de profondeur.
Ensuite, libérez lentement toute la solution DOX. Avant de rétracter l’aiguille, attendez cinq secondes. Alternativement, le poisson peut être positionné latéralement avec l’intérieur vers la droite. Ensuite, injectez la ligne latérale au-dessus de la nageoire pelvienne avec le biseau vers le haut pointant vers 7 heures à un angle de 45 degrés et à 3 à 4 millimètres de profondeur. Si l’une ou l’autre des méthodes d’injection a réussi, il y aura une teinte rouge dans le ventre.
Après l’injection, transférez rapidement le poisson dans un réservoir de passage propre rempli d’eau douce du système où il peut récupérer. Ensuite, rincez l’aiguille avec HBSS et procédez à l’injection du poisson suivant. Plus tard, remettez le poisson injecté dans un système à circulation courante, mais séparé du système principal pour éviter la contamination croisée. Pendant les prochaines 24 heures, continuez à jeûner le poisson. Au cours de la première semaine, après l’injection, assurez-vous de vérifier le poisson tous les jours et d’enlever tout poisson mort.