Génération de mammosphères primaires : une technique pour déterminer l’activité cellulaire

Une seule cellule souche du cancer du sein donne naissance à un amas de cellules appelé mammosphère primaire. Pour les obtenir, il faut d’abord cultiver une lignée cellulaire de cancer du sein jusqu’à ce que 70 % à 80 % soient confluents, afin de s’assurer que les cellules sont dans leur phase de croissance. Ajoutez Tripsin-EDTA pour détacher les cellules du ballon et ajoutez un milieu avec du sérum pour arrêter l’action de Tripsin.

Maintenant, prenez les cellules dans un tube et centrifugez-les pour obtenir la pastille de cellule. Remettez la pastille en suspension dans le milieu de mammosphère sans sérum et passez la suspension à travers un filtre à capuchon de crépine cellulaire, pour obtenir une suspension à cellule unique. Cette suspension se compose de cellules souches, de cellules progénitrices et de cellules différenciées présentant différentes expressions protéiques.

CD44 et CD24 sont des protéines de surface cellulaire caractéristiques des cellules souches du cancer du sein. Ils sont positifs pour l’expression de CD44 et négatifs pour CD24. Isolez les cellules de la suspension cellulaire à l’aide de la fluorescence ou du tri cellulaire activé magnétiquement. Ensuite, appl