Injection orthotopique : implantation de cellules cancéreuses spécifiques à un tissu dans une souris adulte

Pour commencer, placez une souris anesthésiée sur un lit chirurgical et injectez de la buprénorphine, un analgésique pour soulager la douleur, par voie sous-cutanée dans l’épaule. Ensuite, insérez le nez de la souris dans un masque nasal pour fournir un apport continu d’oxygène et d’anesthésique, tel que l’isoflurane à l’animal. À l’aide de ruban adhésif de laboratoire, immobilisez les membres et stérilisez la peau de la poitrine avec de la chlorhexidine et de l’iode, deux désinfectants, et de l’éthanol.

Maintenant, utilisez des ciseaux pour faire une incision au milieu de la paroi thoracique antérieure et inversez la peau avec des pinces pour exposer le coussinet adipeux mammaire blanc. Injectez avec précaution la suspension de cellules cancéreuses exprimant une protéine bioluminescente dans le coussinet adipeux mammaire. Attendez 5 secondes avant de retirer l’aiguille pour éviter le refoulement. Relâchez doucement le coussinet adipeux et utilisez des sutures stériles pour coudre et fermer l’incision.

Les cellules cancéreuses injectées à l’intérieur du coussinet adipeux mammaire se divisent rapidement pour former une tumeur. Remettez l’animal dans une cage après la procédure. Surveillez de près l’animal jusqu’à ce qu’il se remette de l’anesthésie et commence à bouger librement.

Dans le protocole suivant, nous implanterons des cellules d'adénocarcinome mammaire exprimant la luciférase dans le coussinet adipeux mammaire d'une souris adulte.

Commencez par confirmer l'absence de réponse au pincement des orteils chez une souris femelle anesthésiée et collez les membres de l'animal sur une planche chirurgicale. À l’aide de cotons-tiges stériles, stérilisez la zone chirurgicale avec de la chlorhexidine, de l’iode et de l’éthanol à 75 %, et faites une incision cutanée de cinq millimètres au milieu de la paroi thoracique antérieure. Ensuite, soulevez le côté droit de la peau adjacent à l’incision et utilisez des ciseaux de microdissection stériles pour détacher la peau de la paroi thoracique.

Retournez la peau pour exposer le bon coussinet adipeux mammaire numéro deux et utilisez une seringue à insuline d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 28,5 pour injecter soigneusement 20 microlitres de suspension de cellules cancéreuses à travers la plaie dans le coussinet adipeux. Maintenez l’aiguille dans le coussinet adipeux pendant cinq secondes pour permettre au mélange de protéines gélatineuses des cellules cancéreuses de se solidifier avant de retirer l’aiguille et de fermer l’incision avec des sutures stériles 5-0 non résorbables. Ensuite, placez l’animal dans une cage propre avec surveillance jusqu’à ce qu’il décubise complètement.