Transduction pour marquer les cellules tumorales PDX : introduction d’un marqueur fluorescent exprimant un lentivirus dans la cellule tumorale in vitro

Le lentivirus est un rétrovirus qui contient du matériel génétique à ARN. Ce virus fournit une méthode efficace et stable pour introduire des transgènes dans les lignées cellulaires cancéreuses. Commencez par ajouter de la neuraminidase à un tube contenant du lentivirus qui exprime la protéine fluorescente verte, ou GFP. Maintenez le tube à 37 degrés Celsius pendant une heure pour augmenter l'efficacité de liaison du virus.

Ensuite, centrifugez un tube contenant une suspension de cellules tumorales pour former une pastille. Ajoutez un milieu mammosphérique contenant du polybrène pour remettre les cellules en suspension. Le polybrène est un polymère cationique qui augmente l’efficacité de l’infection lentivirale. Maintenant, plaquez le nombre optimal de cellules tumorales par puits dans une plaque de culture tissulaire à six puits. Ajouter la quantité requise de lentivirus dans chaque puits de la plaque de culture.

Faites tourner la plaque pour mélanger le contenu et conservez-la à 37 degrés Celsius pendant 96 heures avec un apport continu de dioxyde de carbone. Le lentivirus pénètre dans la cellule et libère de l’ARN. La transcriptase inverse virale convertit l’ARN en ADN double br