Injection intracanalaire : administration du mélange d’injection dans les canaux de la glande mammaire de la souris

Une injection intracanalaire est une technique d’administration d’un mélange d’injection qui peut contenir des cellules cancéreuses, des vecteurs d’expression ou un agent thérapeutique complété par un colorant traceur dans les canaux de la glande mammaire.

Pour cette procédure, chargez une seringue avec le mélange d’injection. Ensuite, placez une souris anesthésiée côté ventral vers le haut sur un lit chirurgical. Faites une incision sur la peau entre l’inguinale ou la cinquième paire de glandes mammaires. Séparez soigneusement le lambeau cutané du péritoine pariétal pour visualiser l’arbre canalaire.

À l’aide d’une pince, soulevez le mamelon et coupez soigneusement sa partie extérieure pour voir l’ouverture du conduit. À l'aide d'une pince à épiler, soulevez le bord du lambeau cutané et insérez doucement l'aiguille de la seringue dans le mamelon pour administrer le mélange d'injection. Surveiller le mouvement du colorant traçant dans l’arbre canalaire mammaire. Le colorant se répand dans l’arbre ductaire sans s’infiltrer dans le stroma, ce qui indique une injection réussie.

Attendez quelques secondes pour éviter tout déversement, puis retirez lentement l’aiguille du site d’injection. Fermez l’incision avec le clip de plaie. Dans le protocole suivant, nous effectuerons une injection intracanalaire pour délivrer l’adénovirus exprimant Cre dans la glande mammaire de la souris.

Utilisez des techniques aseptiques tout au long de l’intervention chirurgicale. Faites une incision sur la peau à une longueur d’environ un centimètre entre les deux quatrièmes glandes mammaires inguinales. Séparez soigneusement le lambeau cutané du péritoine pariétal, de manière à visualiser l’arbre canalaire mammaire.

Tenez soigneusement le mamelon avec une pince d’horloger pour retirer le mamelon extérieur sans couper la peau à proximité à l’aide d’une ciseau de micro-dissection. Chargez environ trois à cinq microlitres de mélange d’injection d’adénovirus Cre dans une seringue Hamilton de 25 microlitres avec une aiguille à embase métallique de calibre 33 fixée.

Estimez le volume du mélange d’injection dans la seringue en fonction du colorant bleu inclus dans le mélange. Tenez doucement le bord du lambeau cutané à l’aide d’une pince à épiler fine et injectez lentement le mélange d’injection d’adénovirus Cre dans le mamelon tout en surveillant la propagation du colorant bleu dans l’arbre canalaire mammaire. Maintenez le taux d’injection aussi lent que possible pour éviter d’endommager la lumière canalaire.

Une injection intracanalaire réussie est indiquée par les fluides injectés qui se répandent dans tout l’arbre canalaire sans fuite dans le compartiment stromal. Retirez doucement l’aiguille du mamelon pour éviter toute fuite du liquide injecté. Examinez la face distale de la glande mammaire ou la zone environnante du mamelon injecté.

La diffusion du colorant dans le stroma voisin, comme illustré ici, indique une injection de coussinet adipeux mammaire plutôt qu’une injection intracanalaire réussie. Fermez les plaies chirurgicales et la peau à l’aide de pinces à plaie.

Retirez la souris de l’anesthésie et placez-la sur un coussin chauffant à l’intérieur d’une cage propre pour la récupération. Surveiller le développement de la tumeur mammaire comme décrit dans le protocole textuel.