zPDX-Analyse de l’invasivité : étude du comportement invasif des cellules cancéreuses métastatiques dans les xénogreffes d’embryons de poisson-zèbre

Les xénogreffes d’embryons de poisson-zèbre sont utiles dans l’étude de l’invasion des cellules cancéreuses. Préparez des modèles de xénogreffes en injectant des cellules cancéreuses métastatiques marquées par fluorescence et des cellules non cancéreuses dans l’espace périvitellin de deux embryons transgéniques. L’espace périvitellin est un espace entre le périderme de l’embryon et le sac vitellin. Laissez les embryons se développer pendant la période souhaitée.

Pendant cette période, les cellules cancéreuses métastatiques se divisent agressivement au site d’injection tandis que les cellules non cancéreuses restent stables. Après l’incubation, utilisez une pipette pasteur pour transférer les embryons dans un plat suspendu à fond de verre. Retirez l’excès d’eau des œufs et placez les embryons dans la position souhaitée pour l’imagerie. Gardez une lamelle sur le dessus de la parabole et placez la parabole sous un microscope à champ clair.

Capturez des images et analysez le comportement invasif des deux types de cellules. Les cellules cancéreuses métastatiques ont tendance à envahir les vaisseaux sanguins à partir du site d’injection. Ils se déplacent le long de la circulation, puis envahissent les tissus environnants pour proliférer. En revanche, les cellules non cancéreuses restent au site d’injection. Dans l’exemple de protocole, nous injecterons des cellules cancéreuses du sein dans l’espace périvitellin et le canal de Cuvier dans des modèles de xénogreffes de poisson-zèbre pour étudier les métastases.

Pour visualiser les métastases, à l’aide d’une pipette pasteure, transférez l’embryon de poisson-zèbre injecté dans une boîte en polystyrène à fond de verre et retirez l’excès d’eau de l’œuf. Imagez l’ensemble du corps de l’embryon à l’aide d’un microscope confocal réglé sur un faible grossissement pour obtenir un schéma général de dissémination des cellules tumorales.

Utilisez un laser de 488 nanomètres pour visualiser le système vasculaire de l’embryon de poisson-zèbre et un laser de 543 nanomètres pour visualiser les cellules tumorales implantées marquées avec un marqueur fluorescent rouge. Ensuite, scannez l’embryon en huit à dix étapes pour obtenir une image de haute qualité.