Gonflage de l’encre de Chine : une méthode de coloration pour visualiser les nodules tumoraux
JoVE Encyclopedia of Experiments
Recherche sur le cancer
0 vues • 3:07 min • April 30th, 2023
Commencez par placer une souris euthanasiée, côté ventral vers le haut, sur un lit chirurgical et fixez les membres de l’animal. À l’aide de ciseaux, coupez le long de la ligne médiane à travers la cage thoracique jusqu’aux glandes salivaires. Placez l’embout d’une pipette sous la trachée pour l’élever et l’isoler. Faites pivoter le lit chirurgical de 180 degrés. Insérez une aiguille de seringue contenant une tache d’encre de Chine dans la trachée et injectez l’encre dans les poumons jusqu’à ce que vous ressentiez une résistance.
Les cellules cancéreuses sécrètent une grande quantité d’acide lactique qui génère une forte charge négative à la surface des cellules. Lorsque ces cellules sont colorées avec de l’encre de Chine, une coloration acide, la surface cellulaire repousse la tache et reste non colorée.
Utilisez des ciseaux pour couper la trachée et glissez une pince à épiler sous les poumons. Retirez doucement les poumons du corps de l'animal. Rincez les poumons à l'eau et transférez-les dans un flacon contenant la solution de Fekete pour éliminer l'excès de coloration et fixer le tissu dans une hotte. Les nodules tumoraux apparaissent blancs sur le fond sombre.
Dans le protocole suivant, nous effectuerons la technique de gonflage à l’encre de Chine pour valider les métastases pulmonaires.
Pour valider la métastase de la tumeur primitive au poumon, placez d’abord la souris en position couchée sur une planche de polystyrène et fixez les pattes pour assurer un accès non obstrué à la trachée. Vaporisez la souris avec de l’éthanol à 70 %. Ensuite, utilisez une paire de ciseaux pour faire une incision le long de la ligne médiane de l’abdomen de la souris à travers la cage thoracique et vers les glandes salivaires. Identifiez la trachée. Ensuite, utilisez une pince pour retirer les tissus environnants.
Ensuite, en tenant une pointe de pipette dans une main, enfilez l’embout sous la trachée et soulevez doucement le tissu vers le haut et loin du corps. En gardant la trachée surélevée, faites pivoter la plate-forme de dissection de 180 degrés. Ensuite, insérez une seringue à tuberculine d’un demi-cc de calibre 27 dans la trachée et gonflez complètement les poumons avec de l’encre de Chine jusqu’à ce qu’une forte résistance se fasse sentir.
Ensuite, à l’aide d’une paire de ciseaux, coupez la trachée. En maintenant la souris en place avec une pince, insérez une autre pince sous les poumons et retirez les lobes pulmonaires de la souris. Rincez brièvement les poumons dans un bécher d’eau et transférez le tissu dans une hotte. Ensuite, placez les poumons dans un flacon à scintillation en verre contenant 3 millilitres de la solution de Fekete, en bouchant le flacon pour éviter que la solution ne s'évapore. Après quelques minutes, transférez les poumons dans une boîte de Pétri et comptez le nombre de nodules tumoraux métastatiques blancs uniques.
Aperçu
Cet article décrit un protocole permettant de valider les métastases pulmonaires dans un modèle murin à l'aide de la technique d'insufflation à l'encre de Chine. La méthode comprend des interventions chirurgicales visant à isoler la trachée et à insuffler les poumons avec de l'encre de Chine, ce qui permet de visualiser les nodules tumoraux métastatiques.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Oncologie
- Biologie expérimentale
Contexte
- Les métastases pulmonaires sont une complication fréquente de la progression du cancer.
- L’encre de Chine est utilisée comme agent de coloration pour visualiser les nodules tumoraux.
- La technique permet d’évaluer la dissémination métastatique à partir des tumeurs primitives.
- La compréhension des métastases est essentielle pour développer des thérapies anticancéreuses efficaces.
Objectif de l'étude
- Valider la présence de métastases pulmonaires dans un modèle murin.
- Démontrer l'utilisation de l'encre de Chine pour visualiser les nodules tumoraux.
- Fournir un protocole chirurgical détaillé aux chercheurs.
Méthodes utilisées
- Placement d'une souris euthanasiée sur un lit chirurgical.
- Incision à travers la cage thoracique pour accéder à la trachée.
- Insufflation des poumons avec de l'encre de Chine par la trachée.
- Transfert des poumons dans la solution de Fekete pour la fixation et la coloration.
Résultats principaux
- Une inflation réussie des poumons avec de l'encre de Chine a révélé des nodules métastatiques.
- Les nodules tumoraux blancs étaient clairement visibles sur un fond sombre.
- La méthode offrait un moyen fiable d'évaluer la métastase pulmonaire.
- Une visualisation claire facilite la compréhension de la progression du cancer.
Conclusions
- La technique de gonflage à l'encre de Chine est efficace pour valider les métastases pulmonaires.
- Ce protocole peut être utilisé par les chercheurs étudiant la métastase cancéreuse.
- Des études ultérieures peuvent s'appuyer sur cette méthode pour explorer des interventions thérapeutiques.
Questions fréquemment posées
Pertinence industrielle pour les cadres
La visualisation quantitative des nodules tumoraux métastatiques dans les modèles précliniques est essentielle pour valider l'évolution de la maladie et évaluer les hypothèses thérapeutiques. La méthode d'insufflation à l'encre de Chine permet une détection claire et un dénombrement précis des métastases pulmonaires, soutenant ainsi une validation rigoureuse des cibles et une réduction des risques mécanistiques dans les programmes de cancérologie. Cette approche renforce la fiabilité prédictive aux points critiques de découverte et de développement préclinique, éclairant ainsi les décisions d'avancement des portefeuilles de recherche.
Applications stratégiques en recherche et développement biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet une quantification directe de la charge métastatique dans des modèles murins pertinents pour la maladie.
- Permet la validation fonctionnelle des voies métastatiques et des cibles candidates.
- Facilite la détection mécanistique des risques en distinguant le tissu tumoral du tissu normal.
- Fournit des données objectives pour le triage des cibles en oncologie selon leur potentiel métastatique.
Développement de tests et criblage
- Établit un point final reproductible pour évaluer in vivo les composés anti-métastatiques.
- Standardise l'évaluation du nombre de nodules métastatiques afin de permettre la comparabilité entre études.
- Fournit des résultats quantitatifs adaptés à une analyse statistique ultérieure.
- Permet un repérage fiable de l'efficacité des composés dans les criblages précliniques.
Recherche translationnelle et préclinique
- Aligne les résultats précliniques avec les critères d'évaluation cliniques en modélisant la métastase spontanée.
- Permet une continuité allant de la découverte à la validation préclinique de stratégies anti-métastatiques.
- Offre une plateforme pour évaluer des biomarqueurs translationnels de la progression métastatique.
- Guide l'avancement pondéré selon le risque des actifs en oncologie, en se basant sur des mesures métastatiques.
Intégration des pipelines et des flux de travail
La technique de gonflage à l'encre de Chine s'intègre dans la continuité de la découverte en oncologie, depuis la validation précoce des cibles jusqu'aux études précliniques d'efficacité.
- Biologie de la découverte : Permet la vérification d'hypothèses concernant les mécanismes métastatiques et l'implication des voies biologiques.
- Criblage : Fournit un dosage standardisé et quantitatif pour l'analyse des nodules métastatiques.
- Analyse : Permet la comparaison statistique de la charge métastatique entre différents groupes expérimentaux.
- Recherche translationnelle : Établit un lien entre la pertinence préclinique et clinique en modélisant la métastase spontanée.
- Réutilisation institutionnelle : Propose un protocole réutilisable pour divers programmes de recherche en oncologie ciblant la métastase.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive des modèles métastatiques et de la validation des cibles.
- Valeur opérationnelle : Fournit une évaluation standardisée, reproductible et évolutive des métastases pulmonaires.
- Valeur stratégique : Permet des décisions éclairées de type « aller/non aller » et réduit les risques biologiques en phase avancée dans les portefeuilles d'oncologie.
- Impact sur le portefeuille : Soutient la priorisation ajustée au risque des actifs en fonction du potentiel métastatique et de la réponse thérapeutique.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise technique en dissection chirurgicale et en manipulation de modèles in vivo.
- Suppose l'accès à des réactifs de coloration et à des solutions de fixation appropriées (encre de Chine, solution de Fekete).
- Exige une standardisation interéquipes du comptage des nodules et de la communication des données.
- Pourrait nécessiter des adaptations selon les modèles tumoraux ou les sites métastatiques.
- Les limites pratiques incluent l'évaluation en point final uniquement et la dépendance à la détection des nodules visibles.
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Dernière mise à jour : 22 août 2026