Gonflage de l’encre de Chine : une méthode de coloration pour visualiser les nodules tumoraux

Commencez par placer une souris euthanasiée, côté ventral vers le haut, sur un lit chirurgical et fixez les membres de l’animal. À l’aide de ciseaux, coupez le long de la ligne médiane à travers la cage thoracique jusqu’aux glandes salivaires. Placez l’embout d’une pipette sous la trachée pour l’élever et l’isoler. Faites pivoter le lit chirurgical de 180 degrés. Insérez une aiguille de seringue contenant une tache d’encre de Chine dans la trachée et injectez l’encre dans les poumons jusqu’à ce que vous ressentiez une résistance.

Les cellules cancéreuses sécrètent une grande quantité d’acide lactique qui génère une forte charge négative à la surface des cellules. Lorsque ces cellules sont colorées avec de l’encre de Chine, une coloration acide, la surface cellulaire repousse la tache et reste non colorée.

Utilisez des ciseaux pour couper la trachée et glissez une pince à épiler sous les poumons. Retirez doucement les poumons du corps de l'animal. Rincez les poumons à l'eau et transférez-les dans un flacon contenant la solution de Fekete pour éliminer l'excès de coloration et fixer le tissu dans une hotte. Les nodules tumoraux apparaissent blancs sur le fond sombre.

Dans le protocole suivant, nous effectuerons la technique de gonflage à l’encre de Chine pour valider les métastases pulmonaires.

Pour valider la métastase de la tumeur primitive au poumon, placez d’abord la souris en position couchée sur une planche de polystyrène et fixez les pattes pour assurer un accès non obstrué à la trachée. Vaporisez la souris avec de l’éthanol à 70 %. Ensuite, utilisez une paire de ciseaux pour faire une incision le long de la ligne médiane de l’abdomen de la souris à travers la cage thoracique et vers les glandes salivaires. Identifiez la trachée. Ensuite, utilisez une pince pour retirer les tissus environnants.

Ensuite, en tenant une pointe de pipette dans une main, enfilez l’embout sous la trachée et soulevez doucement le tissu vers le haut et loin du corps. En gardant la trachée surélevée, faites pivoter la plate-forme de dissection de 180 degrés. Ensuite, insérez une seringue à tuberculine d’un demi-cc de calibre 27 dans la trachée et gonflez complètement les poumons avec de l’encre de Chine jusqu’à ce qu’une forte résistance se fasse sentir.

Ensuite, à l’aide d’une paire de ciseaux, coupez la trachée. En maintenant la souris en place avec une pince, insérez une autre pince sous les poumons et retirez les lobes pulmonaires de la souris. Rincez brièvement les poumons dans un bécher d’eau et transférez le tissu dans une hotte. Ensuite, placez les poumons dans un flacon à scintillation en verre contenant 3 millilitres de la solution de Fekete, en bouchant le flacon pour éviter que la solution ne s'évapore. Après quelques minutes, transférez les poumons dans une boîte de Pétri et comptez le nombre de nodules tumoraux métastatiques blancs uniques.