Dissociation mécanique : une méthode pour obtenir des cellules viables à partir d’un tissu

Tout d’abord, pesez un fragment de tissu et mesurez sa longueur, sa largeur et sa hauteur. Placez le tissu dans une boîte de culture avec un milieu de culture et coupez-le en petits morceaux à l’aide d’un scalpel. Transférez le tout dans un tube C pour l’homogénéisation à l’aide d’une pipette Pasteur.

Placez le tube dans un dissociateur mécanique et exécutez les cycles nécessaires. L’appareil utilise des forces mécaniques pour extraire des cellules uniques viables de l’échantillon de tissu tout en maintenant l’intégrité cellulaire, y compris les protéines de surface. Décantez l’homogénat à l’aide d’une crépine cellulaire fixée sur un tube de centrifugation.

Réhomogénéisez le tissu restant et filtrez l’homogénat à travers la crépine cellulaire dans le tube. Centrifuger l’homogénat et retirer le surnageant. Maintenant, remettez la pastille cellulaire en suspension dans le milieu de culture et transférez une petite quantité de suspension cellulaire dans un tube contenant une coloration bleue de trypan.

Après la coloration, transférez les cellules sur une lame d’hémocytomètre. Comptez les cellules viables transparentes. Les cellules mortes absorbent la coloration, car leur membrane cel