Injection dans la veine caudale : méthode d’administration de cellules cancéreuses pour des études métastatiques dans un modèle murin

Commencez par ajouter de la trypsine dans une boîte de Pétri contenant des cellules cancéreuses du sein marquées pour les détacher de la surface. Ajouter un milieu contenant du sérum pour arrêter l’action de la trypsine. Transférez la suspension cellulaire dans un tube conique et centrifugez-la dans la cellule à granulés.

Jetez le surnageant et remettez les cellules en suspension dans une solution saline tamponnée au phosphate. Placez le tube sur de la glace pour ralentir le métabolisme cellulaire. Chargez cette suspension cellulaire contenant la quantité requise de cellules dans une seringue Luer lock et fixez-y une aiguille.

Placez une souris dans une contention pour rongeurs avec sa queue à l’extérieur. Trempez la queue dans de l’eau tiède pour dilater les veines. Il y a deux veines sur les côtés latéraux et une artère sur le côté ventral de la queue. Essuyez la queue avec de l’alcool, insérez l’aiguille et injectez la suspension cellulaire.

Une fois dans la circulation sanguine, les cellules cancéreuses injectées envahissent les organes, tels que les poumons, et prolifèrent. Retirez lentement l’aiguille et utilisez une gaze stérile sur le site d’injection pour appliquer une pression afin d’arrêter le saignement. Remettez la souris dans sa cage et assurez-vous d’une récupération complète. Dans le protocole suivant, nous démontrons l’injection de cellules cancéreuses métastatiques marquées dans un modèle murin pour quantifier les métastases et la colonisation du cancer du sein.

Aspirez le média et rincez les plaques cellulaires avec 1X PBS. Trypsinisez les cellules avec 5 millilitres de trypsine par plaque de 15 centimètres pendant deux à cinq minutes et transférez toutes les cellules dans un tube conique. Lavez les cellules restantes de la boîte de culture tissulaire avec suffisamment de milieu de croissance complet pour éteindre la trypsine. Ajoutez le lavage dans le même tube conique. Comptez les cellules à l’aide d’un compteur de cellules automatisé pour déterminer le nombre total de cellules.

Ensuite, centrifugez les cellules à 122 fois G pendant trois minutes et aspirez le surnageant. Remettez les cellules en suspension dans 1X PBS à la concentration souhaitée. Ici, 25 000 cellules sont injectées dans chaque souris dans 100 microlitres de PBS, de sorte que les cellules remises en suspension sont à 250 000 cellules par millilitre. Maintenir les suspensions cellulaires sur de la glace jusqu’à l’injection.

En travaillant dans une hotte à l’animalerie, mélangez doucement mais soigneusement les cellules en inversant le tube ou en utilisant une seringue de 1 millilitre pour vous assurer qu’elles sont uniformément remises en suspension. Maintenant, chargez une seringue Luer lock de 1 millilitre avec une suspension cellulaire et expulsez les bulles d’air en excès. Placez une aiguille de calibre 30 sur la seringue avec le biseau vers le haut et expulsez les bulles d’air.

Placez délicatement la souris dans une contention pour rongeurs. La veine latérale de la queue doit être visible et dilatée. Sinon, pincez doucement la base de la queue et trempez la queue dans de l’eau chaude du robinet pour dilater les veines. Utilisez une lingette imbibée d’alcool pour nettoyer la queue. Insérez ensuite l’aiguille dans la veine de la queue, côté biseau vers le haut, et injectez 100 microlitres de suspension cellulaire. Si l’aiguille est correctement insérée dans la veine, elle devrait facilement glisser légèrement vers l’avant et vers l’arrière, et il ne devrait pas y avoir de résistance lorsque le piston est poussé.

Les injections réussies doivent également entraîner une rougeur, dans laquelle la couleur bleue de la veine devient blanche pendant quelques secondes après l’injection. Retirez lentement l’aiguille et, à l’aide d’une gaze stérile, appliquez une pression sur le site d’injection pour arrêter tout saignement. Remettez la souris dans sa cage et surveillez-la pendant 15 minutes pour assurer une récupération complète.