Gonflage de l’agarose pulmonaire entière : une méthode de préparation des poumons pour l’imagerie en direct ex vivo

- Tout d’abord, placez une souris euthanasiée sur une planche de dissection. Juste au-dessus de l’abdomen, coupez la peau et le péritoine. Percez le diaphragme et coupez le long des côtes et de la cage thoracique jusqu’à la trachée. Créez une petite incision dans la trachée. Insérez doucement une aiguille à l’intérieur de la trachée sans blesser la carène et fixez-la avec une pince. Injectez de l’agarose à bas point de fusion à température corporelle normale à l’intérieur des poumons. Retirez lentement la seringue et gardez l’aiguille à l’intérieur pour éviter le reflux de l’agarose.

Versez du PBS froid sur les poumons pour favoriser la gélification de l’agarose. Retirez l’aiguille et fixez la trachée à l’aide d’une pince pour éviter le reflux d’agarose non solidifié. Ouvrez le sternum, tenez la trachée avec une pince et coupez-la à l’aide de ciseaux. Retirez les poumons de la cavité thoracique. Séparez les lobes dans le support. Placer à l’intérieur des puits d’imagerie dans des conditions physiologiques pour la microscopie. L’agarose préserve la morphologie pulmonaire à des températures physiologiques qui aident à observer les interactions cellulaires en direct. Dans le protocole