Escalade de dose : une méthode pour développer une résistance aux médicaments dans les cellules cancéreuses

- Les inhibiteurs de la tyrosine kinase, TKI, empêchent le récepteur kinase de se lier à l’ATP, empêchant ainsi la phosphorylation. Commencez par ensemencer les cellules cancéreuses dans un milieu de croissance. Permettez-leur d’atteindre une densité favorable et transférez les cellules dans plusieurs puits. Après une nuit de croissance, distribuez différentes concentrations de médicament dans plusieurs puits et laissez les cellules se développer pendant la durée souhaitée. Ajoutez du MTT, un colorant soluble dans l’eau, pour mesurer la viabilité cellulaire. Les enzymes mitochondriales convertissent le MTT en formazan violet insoluble à l’intérieur des cellules vivantes.

Arrêtez la réaction en ajoutant un agent solubilisant approprié et mesurez le formazan par spectrophotométrie. Cette méthode s’appelle le test MTT. Tracez un graphique des cellules vivantes indiquées par le formazan en fonction des concentrations de médicaments. Calculez la concentration inhibitrice, IC₅₀, en trouvant la concentration de médicament qui tue 50 % des cellules à l’aide du logiciel.

Ensuite, cultivez des cellules cancéreuses dans le milieu de croissance et répartissez-les dans trois plaques différentes