Dosage de l’extraction d’ARN : une méthode pour extraire de l’ARN de cellules cancéreuses du poumon transfectées par des miARN

- Pour commencer, ensemencez les cellules cancéreuses du poumon dans une fiole en T contenant un milieu de culture tissulaire et laissez-la croître pendant la nuit. Ensuite, suspendez le miARN avec un agent transfecteur dans un milieu transfecteur. Retirez le milieu et ajoutez un milieu transfecteur qui introduira des miARN dans les cellules cancéreuses. Le miARN est une molécule d’ARN non codante qui se lie à une séquence d’ARNm complémentaire et bloque l’expression des gènes. Incuber le ballon pendant la durée souhaitée.

Ensuite, remplacez le milieu par un milieu de culture tissulaire et cultivez pendant la nuit. Ajouter de la trypsine pour la dissociation cellulaire. Transférez le mélange dans un tube à centrifuger contenant du PBS et centrifugez-le. Retirez le surnageant et ajoutez un tampon de lyse pour lyser les cellules et ajoutez de l’éthanol ultra pur pour la précipitation. Placez le mélange dans une colonne de séparation pour purifier l’acide nucléique et centrifugez.

Retirez le flux et ajoutez un tampon de lavage pour éliminer la membrane cellulaire lysée et centrifugez. Retirez le tampon de lavage et ajoutez de la DNase avec le tampon de digestion DNase pour éliminer l’