Analyse du cycle cellulaire : une approche pour étudier la régulation du cycle cellulaire des cellules cancéreuses du poumon transfectées par des miARN

- Un microARN ou miARN est un petit ARN non codant. Après la transfection ou l’introduction de l’ARNm dans une cellule, il forme un complexe protéique de miARN. Le complexe cible et se lie à un ARNm spécifique et régule négativement son expression, arrêtant ainsi la progression du cycle cellulaire.

Pour commencer l’analyse, ajoutez un fixateur déshydratant approprié à une culture récoltée de cellules cancéreuses du poumon transfectées par des miARN. Le fixateur préserve les cellules et perpétue également la membrane cellulaire. Traitez les cellules avec un mélange d’iodure de propidium, d’un colorant d’acide nucléique fluorescent et d’enzyme ribonucléase.

Le colorant pénètre dans les cellules et colore à la fois l’ADN et l’ARN. Les enzymes dégradent spécifiquement l’ARN, ce qui permet une quantification optimale de l’ADN. À l’aide d’un cytomètre en flux, déterminez la proportion de cellules arrêtées dans différentes phases du cycle cellulaire en fonction de l’intensité de la fluorescence des cellules individuelles.

Les cellules en phase de repos et de croissance ont une teneur en ADN plus faible et donc une intensité de fluorescence plus faible. Les cellules de la phase Gap 2 avec