Préparation d’échantillons de tumeurs fixées au formol et enrobées de paraffine : un protocole pour préserver les échantillons de tissus et de cytologie du cancer du poumon non à petites cellules (CPNPC)

- Pour commencer, obtenez des échantillons de tumeurs pulmonaires sous forme d’échantillons de tissus ou d’échantillons cytologiques à partir de lavages bronchiques - un lavage salin contenant des cellules de l’intérieur des voies respiratoires. Pour préparer des échantillons de tissus, transférez des tissus pulmonaires fraîchement disséqués dans une cassette d’enrobage. Fixez et préservez le tissu avec la concentration appropriée de formol.

Pour préparer des échantillons de cytologie, il faut d’abord traiter les lavages bronchiques avec du DL-dithiothréitol pour l’homogénéisation. Centrifugez et retirez le surnageant. Ensuite, traitez avec une solution mucolytique pour liquéfier le mucus et séparer les cellules. Centrifugeuse pour granuler les cellules et les fixer avec du formol. Traitez les cellules avec un réactif de préparation de bloc cellulaire approprié pour concentrer l’échantillon tout en travaillant avec de petits volumes de granulés.

Transférez le granulé dans une cassette d’encastrement. Traitez les deux types d’échantillons en les déshydratant à travers une série de bains d’alcool gradués. Éliminez l’alcool à l’aide d’un agent nettoyant approprié suivi d’une infiltration de cire. Incorporez la cassette dans de la cire de paraffine liquide et laissez-la se solidifier. Cela forme une couche autour du tissu, maintenant l’échantillon en place.

À l’aide d’un microtome, vous obtiendrez des tronçons finement tranchés. Placez les sections sur des lames de verre chargées positivement pour faciliter l’adhérence. Sécher et teindre pour observer les lames au microscope. Dans le protocole suivant, nous démontrons des techniques de préparation d’échantillons à partir d’échantillons de tissus tumoraux pulmonaires et d’échantillons cytologiques.

Pour commencer, fixez le tissu tumoral dans du formol tamponné neutre à 10 % dans une cassette et intégrez la cassette dans de la paraffine comme indiqué dans le protocole de texte. Incorporez le tissu infiltré dans un moule rempli de paraffine fondue. Laissez les tissus rester dans le moule jusqu’à ce que la paraffine se solidifie. Après cela, utilisez un microtome pour sectionner le tissu inclus dans la paraffine à une épaisseur de trois micromètres.

Transférez le ruban de paraffine sur une lame de microscope en verre chargé positivement. Ensuite, séchez la lame pendant une heure à 37 degrés Celsius. Tout d’abord, recueillez les lavages bronchiques dans une solution de préservation. Transférez les lavages dans un tube conique de 50 millilitres. Ajoutez deux grammes de DL-dithiothreitol et agitez le tube pendant 30 minutes. Puis centrifuger à 250 fois g pendant cinq minutes à température ambiante.

Retirez le surnageant et ajoutez 10 millilitres d’une solution mucolytique. Agiter l’échantillon à vitesse moyenne pendant 20 minutes et centrifuger à 250 fois g pendant cinq minutes à température ambiante. Après cela, retirez le surnageant et déposez la pastille de cellule dans un tube de collecte contenant 10 % de formol tamponné neutre.

Ajouter quatre gouttes d’un agent de préparation de bloc cellulaire. Transférez la pastille de cellule dans une cassette. Fixez la pastille cellulaire pour l’enrobage et la section de la paraffine en utilisant le processus décrit précédemment pour la préparation d’échantillons de tissu tumoral.