Dosage de l’immunofluorescence : une méthode pour identifier les cellules tumorales capturées sur un fil médical

- Prenez un fil fonctionnalisé ayant une petite portion d’or recouverte d’un hydrogel couplé à des anticorps d’intérêt. Trempez la partie dorée du fil dans un flacon contenant des cellules tumorales. Fermez-le à l’aide d’un bouchon de fil et incubez-le dans un rotateur de tube. Les cellules tumorales circulantes ou CTC présentant des antigènes de surface se lient aux anticorps sur le fil. Rincez le fil en le trempant dans des flacons contenant une solution saline tamponnée au phosphate ou PBS et séchez-le à l’air. Trempez maintenant le fil dans une solution d’acétone pour fixer les cellules en les déshydratant.

Ensuite, insérez doucement le fil à travers un embout P200 avec la partie fonctionnalisée à l’intérieur. Remplissez le ruban d’un anticorps conjugué à un fluorochrome pour immerger le fil. Ces anticorps marqués se lient à leurs antigènes respectifs présents sur les cellules. Scellez l’ouverture avec un film de laboratoire et incubez toute la nuit dans l’obscurité à 4 degrés Celsius. Ensuite, lavez le fil avec du PBS pour éliminer tous les anticorps non liés. Placez le fil dans un support de fil et observez-le au microscope fluorescent. Les CTC liées par des anticorps devienn