Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 3:59 min • April 30th, 2023
- Les microARN, ou miARN, sont de petits ARN non codants impliqués dans la régulation des gènes. Leurs expressions sont modifiées au cours du cancer et sont donc des biomarqueurs potentiels du cancer. Pour commencer l’isolement des miARN, prélevez un échantillon de sang total fraîchement prélevé et centrifugez-le à 4 degrés Celsius pour séparer le plasma des cellules sanguines. Transférez le surnageant dans un tube frais et centrifugez-le à nouveau pour obtenir un surnageant plasmatique plus clair. Extraire le surnageant, traiter avec une solution d’homogénéisation réfrigérée, suivie d’un tampon de lyse pour homogénéiser l’échantillon. Ajouter une solution enzymatique de protéinase K pour dégrader les protéines, en particulier les nucléases qui digéreraient autrement l’ARN pendant les étapes en aval.
- Ensuite, chargez le lysat dans le puits désigné d’une cartouche d’extraction d’acide nucléique pré-assemblée spécifique à l’instrument. Ajouter la solution de DNase 1 dans le puits approprié pour éliminer l’ADN génomique de l’échantillon. Ajoutez de l’eau exempte de nucléases dans le tube d’élution assemblé sur la cartouche pour le conditionnement avant l’isolement des miARN. Chargez
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