Coloration immunohistochimique : une méthode pour obtenir des informations spatiales à partir de coupes de tissus minces

- Commencez par placer une mince section de tissu dans une solution d’ammoniac pour permettre une récupération douce de l’antigène. Transférez la section sur une lame recouverte de polylysine. Les cellules chargées négativement se lient à la polylysine chargée positivement. Ensuite, ajoutez du peroxyde d’hydrogène pour bloquer l’activité endogène de la peroxydase. Lavez la lame dans une solution saline Tris-Buffered, TBS.

Le TBS favorise l’accès des anticorps aux antigènes en brisant les réticulations protéiques. Lavez la section avec une solution en bloc pour réduire la liaison des anticorps non spécifiques. Ajoutez les anticorps primaires à la section et incubez pendant la nuit. L’anticorps primaire se lie à son antigène spécifique présent à la surface de la cellule. Lavez la diapositive avec du TBS.

Ajoutez des anticorps secondaires conjugués à la biotine qui se fixent à la région Fc de l’anticorps primaire. Lavez la section avec l’enzyme streptavidine-biotine peroxydase. Ensuite, ajoutez le substrat chromogène de la peroxydase au tissu. La peroxydase convertit le chromogène en un produit insoluble coloré.

Contre-colorez le tissu avec une solution d’hématoxyline. L’hématoxyline