Isolement des exosomes : une technique pour séparer les exosomes du plasma des patients atteints d’un cancer du poumon non à petites cellules

- Les exosomes sont de petites vésicules membranaires portant des biomolécules telles que des lipides, des protéines, de l’ADN, de l’ARNm et des microARN. Les exosomes sont libérés par différents types de cellules dans les espaces extracellulaires et peuvent être isolés à partir de biofluides comme le plasma.

Pour commencer, centrifugez l’échantillon de plasma pour éliminer les cellules et les débris. Transférez le surnageant plasmatique dans un tube frais. Traitez le plasma avec la concentration souhaitée d’enzyme ribonucléase. Incuber l’échantillon sur un bloc chauffant à 37 degrés Celsius pendant une durée appropriée.

L’enzyme dégrade tout ARN libre dans l’échantillon, tandis que l’ARN exosomal reste protégé. Diluez l’échantillon à l’aide de PBS. Ensuite, ajoutez la concentration souhaitée de solution enzymatique de protéinase K et incubez à 37 degrés Celsius pendant un temps approprié. La protéinase K dégrade la majeure partie des protéines plasmatiques. Il inactive également l’enzyme ribonucléase précédemment ajoutée, éliminant ainsi le risque de dégradation de l’ARN exosomal pendant le traitement en aval.

Ajouter un volume approprié de tampon de précipitation d’exosomes pour