Instillation et fixation pulmonaires : introduction de liquide dans la trachée et fixation des poumons pour mesurer le volume pulmonaire fixe

- L’instillation pulmonaire est utilisée pour introduire une substance directement dans la trachée pour analyser les poumons de souris atteintes de cancer ou d’autres pathologies. Tout d’abord, placez une souris anesthésiée sur une plate-forme d’intubation inclinée et rasez les poils du cou. Faites une petite incision avec des ciseaux sous le cou et tirez doucement sur la peau à l’aide d’une pince pour révéler la trachée. Insérez un cathéter dans la trachée par la bouche et observez-le à travers une incision. Injectez un exemple de liquide dans la trachée et gonflez rapidement les poumons en introduisant de l’air avec une seringue vide pour répartir correctement le liquide.

Fermez la plaie et placez la souris dans une chambre de récupération. Après la période souhaitée, sacrifiez la souris et exposez les poumons. Gonflez-le avec un fixateur pour quantifier la capacité pulmonaire totale. Placez les poumons dans un tube avec un fixateur. Mesurez le volume pulmonaire fixe en utilisant le principe d'Archimède. Placez les poumons dans l’eau et appuyez dessus avec un appareil filaire. Notez le poids de l’eau déplacée par les poumons immergés. La fraction du volume pulmonaire dans le poumon gauche fixe est généralement plus petite que celle mesurée in vivo.

- Avant de commencer la procédure, pliez manuellement l’extrémité d’une canule intraveineuse commerciale de calibre 20 de 1 pouce de long en une légère courbure. Ensuite, après avoir confirmé l’anesthésie par l’absence de réponse au pincement de l’orteil, appliquez une pommade sur les yeux d’une souris adulte et fixez la souris en position couchée sur une plate-forme inclinée avec un grand classeur de bureau et des boucles de suture. Rasez la partie ventrale du cou et désinfectez la peau avec de l’alcool à 70 %. Ensuite, à l’aide de ciseaux tranchants, faites une petite incision chirurgicale dans le cou, à environ 12 millimètres sous l’incisive inférieure.

Ensuite, utilisez une pince pour tirer doucement la peau du cou vers la caudale jusqu’à ce que la paroi ventrale de la trachée soit visible. Ensuite, rétractez doucement la langue et insérez la canule avec l’extrémité pliée inclinée vers la surface ventrale de la souris. En tirant à nouveau doucement sur la peau du cou comme nous venons de le démontrer, insérez la canule dans la trachée. Lorsque le cathéter peut être observé dans la trachée, avancez le cathéter d’environ 5 millimètres pour passer les cordes vocales.

Placez maintenant l’extrémité d’une pipette de chargement de gel chargée de 50 microlitres d’instillation dans le moyeu inférieur du cathéter. Confirmez le mouvement du liquide dans la pointe en synchronisation avec la respiration de la souris, puis injectez l'instillé. À l’aide d’une seringue de 1 millilitre, gonflez immédiatement les poumons avec 0,6 millilitre d’air à travers le cathéter pour aider à répartir le liquide profondément dans les poumons, puis retirez la canule. Fermez la plaie chirurgicale avec une petite quantité d’adhésif cyanoacrylate et placez la souris dans une cage individuelle avec surveillance jusqu’à ce qu’elle soit complètement rétablie.

Après le dernier point expérimental, faites une petite incision dans le cou de l’animal pour exposer la face ventrale de la trachée. Insérez ensuite une pointe d’aiguille tronquée de calibre 18 dans la trachée. À l’aide de fil, attachez l’aiguille dans la trachée et ouvrez soigneusement le thorax avec une incision médiane. Ensuite, coupez le diaphragme et retirez les parois latérales de la poitrine pour exposer le poumon. Ensuite, assurez-vous qu’il n’y a pas d’air dans le tube de fixation en faisant couler du formaldéhyde à l’extrémité du robinet d’arrêt. Ensuite, connectez le réservoir de formol et le tube rempli directement à l’extrémité inférieure de l’aiguille de trachéotomie.

Placez la surface supérieure du formaldéhyde à 25 centimètres au-dessus du niveau de la bouche et ouvrez le robinet d’arrêt pour gonfler les poumons avec un fixateur. Après avoir laissé les poumons sous pression pendant au moins 20 minutes, tirez lentement sur l’aiguille pour exposer une plus grande partie de la trachée non canulée tout en attachant la trachée au-delà de l’extrémité de l’aiguille tronquée. Lorsque la trachée est solidement attachée, retirez le robinet d’arrêt et disséquez soigneusement les poumons. Ensuite, placez les poumons dans du formaldéhyde pendant la nuit.

Ici, un dispositif typique pour maintenir les poumons en place pendant le volume pulmonaire fixe, fabriqué à partir de pipettes en plastique et de fil mince de calibre 20, est présenté. Pour mesurer le volume pulmonaire fixe, disséquez d’abord le cœur et tout autre tissu non pulmonaire des poumons. Ensuite, placez un bécher contenant environ 200 millilitres d’eau équipé d’un dispositif de support de fil sur une balance et tarez l’équipement.

Retirez ensuite l’appareil, placez le poumon à la surface de l’eau et utilisez l’appareil pour presser le tissu sous l’eau en veillant à ce que le poumon, la suture ou toute partie de l’appareil ne touche pas les côtés ou le bas du bécher. Enregistrez le poids sur la balance. Ce nombre reflète le volume d’eau déplacé et constitue donc une mesure directe du volume pulmonaire. Ensuite, séchez le poumon sur un essuie-glace, tarez à nouveau le bécher avec l’appareil et répétez la mesure du volume pulmonaire. Il faut ensuite faire la moyenne des deux mesures de volume.