Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 5:29 min • April 30th, 2023
- Prenez un fil fonctionnalisé avec des cellules attachées à sa surface et colorées par coloration par immunofluorescence. Lavez-le avec une solution saline glacée de citrate de sodium ou de SSC. Placez le fil dans un microtube contenant des sondes marquées par fluorescence et fermez-le à l’aide d’un bouchon de fil. Incuber le microtube dans une chambre sombre et humide dans un four d’hybridation à 75 degrés Celsius pour dénaturer l’ADN à l’intérieur des cellules.
Transférez la chambre dans un four à 37 degrés Celsius pour que les sondes se lient à la séquence complémentaire sur l’ADN. Ensuite, sortez la chambre du four et retirez le fil. Trempez le fil dans un tube contenant une solution de SSC à la température souhaitée. Laver le fil avec la solution SSC contenant Tween pour éliminer les sondes non spécifiques ou partiellement hybridées, puis laver à nouveau à l’eau distillée.
Séchez le fil et incubez l'extrémité fonctionnalisée dans une solution de DAPI pour colorer les noyaux de la cellule. Rincez le fil dans du PBS et séchez-le à l’air. Placez le fil sous un microscope à fluorescence. La sonde hybridée avec le gène d'intérêt apparaît sous la forme d'une tache fluorescente dans
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