Greffe d’îlots pancréatiques : méthode d’implantation d’îlots pancréatiques dans la chambre antérieure de l’œil de souris pour l’imagerie in vivo

- Les îlots pancréatiques contiennent des cellules bêta qui sécrètent de l’insuline. Chez les patients atteints de diabète de type 1, les cellules bêta productrices d’insuline deviennent dysfonctionnelles. La transplantation d’îlots chez ces patients offre un potentiel de contrôle glycémique. Pour évaluer l’efficacité de la transplantation, nous utilisons des modèles animaux tels qu’une souris dont la chambre oculaire antérieure est un site optimal pour la greffe et l’imagerie in vivo.

Pour la transplantation d’îlots, placez une souris anesthésiée sur un coussin chauffant chaud et injectez de la buprénorphine, un analgésique pour soulager la douleur, par voie sous-cutanée à l’arrière de la souris. Ensuite, insérez le nez de la souris dans un masque nasal pour un apport continu d'oxygène et d'isoflurane anesthésique.

Fixez la tête de la souris dans le support de tête pour exposer l'œil et rétractez doucement la paupière à l'aide d'une pince émoussée pour faire sortir l'œil. Chargez une canule avec des îlots marqués par fluorescence. Insérez la demi-pointe de la canule dans la cornée. Soulevez la cornée, distribuez doucement les îlots, retirez la canule et appliquez du gel pour les yeux.

Après la durée souhaitée, placez la souris sous un microscope à deux photons et prenez des images. Vous pouvez observer des vaisseaux sanguins formant un réseau microvasculaire tout au long de la greffe. Dans le protocole suivant, nous effectuerons une greffe d'îlot pancréatique humain dans la chambre antérieure de l'œil de la souris.

Pour commencer, placez la souris sur un coussin chauffant chaud, positionnez-la dans le support de tête et mettez le masque nasal. Utilisez le pouce et l’index pour soulever légèrement la tête. Fixez-le avec les pièces métalliques sur les côtés, en vous assurant que les oreillettes fixent la tête directement sous les oreilles. Par voie sous-cutanée, injectez la solution de buprénorphine dans le dos de la souris. Rétractez doucement les paupières de l’œil à transplanter à l’aide d’une pince émoussée. Sortez l’œil et fixez-le sans serrer à l’aide d’une pince à épiler recouverte d’un tube en polyéthylène.

Après avoir transféré les îlots dans une boîte de Pétri avec PBS, prélevez environ 20 à 30 îlots dans la canule oculaire. À l’aide d’une aiguille de calibre 25, biseautez vers le haut, insérez soigneusement l’extrémité dans la cornée et faites une seule incision latérale. Soulevez délicatement la cornée avec la canule préchargée d’îlots et relâchez lentement les îlots dans l’œil. Rétractez lentement la canule et appliquez du gel pour les yeux sur l’œil.

Après 10 minutes, retirez la pince qui maintient la paupière et remettez l’œil dans sa position normale. Pour l’imagerie d’îlots humains implantés avec la microscopie à deux photons, placez la plate-forme du support de tête sous le microscope et administrez du gel pour les yeux sur l’œil sous forme de liquide d’immersion entre la cornée et le cristallin. Placez l’œil sous l’objectif et imagez les îlots humains implantés comme décrit dans le manuscrit du texte.