Électroporation organoïde : une méthode pour transfecter l’ADN plasmidique dans des organoïdes gastro-intestinaux

- Les organoïdes sont de minuscules cultures cellulaires tridimensionnelles dérivées de cellules souches spécifiques aux tissus. Ils sont génomiquement stables mais génétiquement modifiables par transfection et donc idéaux pour l’investigation génétique. Pour la transfection, semez les organoïdes dans une plaque de culture multipuits avec un milieu de culture spécifique et incubez pendant la durée souhaitée. Ensuite, ajoutez un mélange de dissociation à la plaque pour aider à la dissociation des cellules organoïdes. Transférez le mélange dans un tube et centrifugez. Remettre en suspension la pastille organoïde dans un tampon d’électroporation contenant de l’ADN plasmidique marqué par fluorescence. Le tampon stabilise les cellules et empêche la mort cellulaire due au stress électrique.

Transférez le mélange dans une cuvette et électroporatez les cellules. Les impulsions électriques à travers la membrane cellulaire entraînent la formation temporaire de pores pour faciliter l’absorption de l’ADN plasmidique dans la cellule. Après l’électroporation, ajoutez immédiatement le milieu de culture à la suspension cellulaire et transférez le mélange dans un tube. Maintenant, centrifugez les c