Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 3:21 min • April 30th, 2023
- La partie exocrine du pancréas constitue les cellules acineuses et les cellules canalaires. Les cellules acineuses synthétisent et sécrètent des enzymes digestives dans leur lumière. Les cellules canalaires tapissent le tube qui délivre ces enzymes à l’intestin grêle. Pour s’adapter au stress génétique et environnemental, les cellules acineuses subissent une conversion morphologique et fonctionnelle en cellules semblables à des canaux, appelées métaplasie acineuse à canalaire, ou ADM.
Parfois, l’ADM peut entraîner l’apparition d’un cancer du pancréas. Pour induire l’ADM ex vivo, préparez une suspension cellulaire de collagène réfrigérée en combinant des cellules acineuses primaires avec du gel de collagène maintenu sur de la glace pour empêcher la solidification de la matrice. Traitez la suspension avec un stimulant ou un inhibiteur ADM d’intérêt.
Répartissez la suspension dans une plaque de culture et incubez pour faciliter la solidification du collagène et y intégrer les cellules. Ensuite, pipetez un volume supplémentaire de milieu contenant le stimulant ou l’inhibiteur ADM d’intérêt sur la couche cellulaire de collagène solidifiée.
Incuber la plaque pendant une durée appropriée. Avec l’induction de la métaplasie acineuse à canalaire, les cellules acineuses primaires de forme pyramidale se transdifférencient pour former des cellules avec une morphologie de cellule de canal. Dans le protocole suivant, nous démontrerons l’induction ex vivo de la métaplasie acineuse à canalaire dans les cellules acineuses primaires murines en utilisant le TGF alpha comme stimulant.
- Pour fabriquer un gel de collagène, combinez 7 millilitres de collagène de queue de rat de type 1, 700 microlitres de 10 fois le milieu de Waymouth et 466,6 microlitres d'hydroxyde de sodium de 0,34 molaire dans un tube de 50 millilitres sur de la glace pour faire du gel de collagène. Dans un tube de 50 millilitres, combinez des volumes égaux de suspension cellulaire et de gel de collagène après trois heures d'incubation et mélangez délicatement. Plaquez 2 000 microlitres un puits à la fois dans une plaque à six puits tout en gardant la plaque sur de la glace, et remuez pour répartir uniformément la couche de cellules de collagène.
Pour solidifier le milieu, incubez la plaque dans un incubateur de culture cellulaire à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone pendant 30 minutes. Ajoutez ensuite 1,5 millilitres par puits de 1 fois le milieu complet de Waymouth avec le stimulus ou les inhibiteurs souhaités.
Changez de support le lendemain, puis tous les deux jours. Selon le stimulus utilisé, la métaplasie acineuse-canalaire, ou ADM, peut être observée entre le troisième et le cinquième jour.