Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 5:08 min • April 30th, 2023
- Les cellules cancéreuses exprimant la protéine fluorescente verte ou GFP permettent de surveiller la croissance tumorale et les métastases par imagerie optique non invasive. Nous implantons généralement ces cellules dans un modèle orthotopique, ce qui permet de recréer le microenvironnement tumoral et d’imiter l’interaction des cellules tumorales avec leur environnement.
Commencez par placer une souris anesthésiée sur un coussin chauffant chaud. Maintenant, insérez son nez dans un masque nasal pour lui fournir de l’oxygène et de l’isoflurane, un anesthésique. À l’aide de ciseaux, faites une petite incision et coupez le tissu. Retirez doucement la rate avec le pancréas et localisez la queue pancréatique.
Chargez une seringue avec une suspension de cellules cancéreuses fluorescentes et injectez-la doucement dans la queue pancréatique. Une bulle superficielle apparaît au site d’injection confirmant la réussite de l’implantation. Replacez les organes dans la cavité corporelle et utilisez une suture stérile pour fermer l’incision. Maintenant, remettez la souris dans une cage et surveillez-la jusqu’à ce qu’elle se rétablisse.
Après la durée souhaitée, placez la souris dans une chambre d’imagerie et prenez des images. Le faisceau lumineux frappe les cellules cancéreuses et excite la GFP, qui, à son tour, produit une fluorescence verte. Dans le protocole suivant, nous effectuerons l’implantation chirurgicale de cellules cancéreuses du pancréas exprimant la GFP dans un modèle murin orthotopique.
Pour implanter les cellules, appliquez d'abord une pommade sur les yeux d'une souris anesthésiée et placez l'animal sur un coussin chauffant recouvert d'un rideau stérile. Ensuite, désinfectez délicatement le flanc de l’animal avec trois gommages à l’iode suivis de trois rinçages à l’éthanol à 70 %. Après avoir confirmé l’absence de réponse au pincement des orteils, chargez environ 200 microlitres des cellules préparées dans une seringue TB pré-refroidie de 1 millilitre équipée d’une aiguille de calibre 18.
Remplacez l’aiguille de calibre 18 par une aiguille de calibre 27 et remettez les cellules sur de la glace. Ensuite, localisez la zone générale de la rate dans le quadrant supérieur gauche de l’abdomen. À l’aide d’une pince, pincez la peau au-dessus de la rate et faites une incision d’environ 1 centimètre pour créer une poche. Ensuite, pincez le muscle lisse au-dessus de la rate et coupez le tissu pour accéder à la cavité péritonéale.
Ensuite, saisissez doucement l’extrémité caudale de la rate et retirez-la de la cavité corporelle. À l’aide d’un coton-tige stérile humide, étalez le pancréas attaché à l’extrémité de la rate pour localiser la queue pancréatique. Délivrer 50 microlitres de cellules dans la queue pancréatique. Ensuite, faites pivoter lentement l’aiguille hors du pancréas.
Une implantation réussie ressemblera à une bulle superficielle sans aucune fuite. Remettez les organes dans la cavité péritonéale et enfermez le tout avec le muscle et la peau. Ensuite, utilisez une suture 6-0 pour fermer l’incision. Ensuite, injectez du kétoprofène aux animaux et surveillez-les jusqu’à ce qu’ils soient complètement rétablis. Au moment expérimental approprié, utilisez un système d’imagerie commercial pour petits animaux pour imager la croissance tumorale chez l’animal vivant sous anesthésie et sélectionner les filtres d’excitation et d’émission appropriés.
Ensuite, obtenez une première image en utilisant uniquement la lumière blanche. En gardant l’animal dans la même position, passez aux filtres GFP et acquérez une deuxième image. Pour analyser la croissance tumorale, superposez les images blanches et fluorescentes pour évaluer la zone fluorescente et l’intensité des cellules tumorales.