Établissement d’un modèle murin expérimental de métastases : implantation de cellules organoïdes CRC exprimant la GFP dans un modèle PDX pour détecter les micrométastases

- Les micrométastases sont un petit groupe de cellules cancéreuses qui se détachent d’une tumeur primaire et se propagent à différentes parties du corps via le sang ou les ganglions lymphatiques. Pour détecter les micrométastases, suspendez les cellules organoïdes du cancer colorectal dans le PBS pour maintenir le pH et chargez la suspension cellulaire dans une seringue. Ensuite, placez une souris anesthésiée en position couchée sur un lit chirurgical. Faites une petite incision à l’aide de ciseaux sur la partie inférieure du flanc gauche et exposez la rate. Retirez doucement la rate à l’aide d’une pince à épiler et injectez lentement la suspension cellulaire dans la rate. Fermez l’incision à l’aide de sutures et retournez l’animal dans sa cage. Surveillez-le jusqu’à ce qu’il se rétablisse.

Après la période d’injection souhaitée, sacrifiez la souris pour disséquer les tumeurs primaires et les différents tissus. Observez des tissus disséqués au microscope à fluorescence. Les cellules cancéreuses exprimant la GFP développent une tumeur primaire au site injecté dans la rate. Quelques cellules cancéreuses de la tumeur primitive se déplacent vers un autre organe, généralement le foie, pour former des colonies micrométastatiques. Dans le protocole suivant, nous établirons un modèle murin expérimental de métastases de cellules organoïdes cancéreuses colorectales exprimant la GFP.

- Pour établir un modèle expérimental de métastases de xénogreffes tumorales dérivées de patients atteints de CCR, diluez les suspensions de cellules tumorales uniques à une concentration de 4 fois 10 à quatre cellules par 50 microlitres et chargez 50 microlitres de cellules par souris dans une seringue équipée d’une aiguille de calibre 22. Placez la première souris NOG anesthésiée en position couchée sur le banc et faites une petite incision dans la région inférieure du flanc gauche.

Utilisez des ciseaux et une pince à épiler stériles pour couper soigneusement le péritoine et exposer la rate, et utilisez la pince à épiler pour saisir la graisse attachée à la rate. Ensuite, injectez lentement 50 microlitres de suspension de cellules tumorales dans la rate, en veillant à ce qu’aucune fuite ne soit observée.

Une fois que toutes les souris ont été injectées et suturées si nécessaire, retournez les animaux dans leurs cages d’origine et vérifiez la fuite de suture et la viabilité un jour après la livraison des cellules tumorales. Utilisez des pieds à coulisse pour mesurer les tumeurs chaque semaine, en récoltant les tumeurs primaires et les tissus pertinents jusqu’aux points finaux expérimentaux appropriés. Transférez les tumeurs et les organes disséqués dans 5 millilitres de PBS glacé dans une boîte de Pétri de 10 centimètres sur de la glace et observez les tissus disséqués sous un microscope à stéréofluorescence pour évaluer leur expression GFP.