Méthode de la goutte suspendue : une technique pour générer des sphéroïdes de mélanome en 3D

- Les sphéroïdes sont des modèles tridimensionnels de culture cellulaire in vitro qui imitent l’architecture tumorale in vivo et aident à étudier les interactions intra-tumorales. Pour mettre en place la culture, préparez d’abord une suspension unicellulaire de cellules de mélanome dans leur milieu approprié. Ensuite, repérez de petits volumes de cette suspension cellulaire, suffisamment écartés sur la surface intérieure du couvercle d’une boîte de culture stérile et non adhésive. Retournez soigneusement le couvercle et placez-le sur la base de la boîte de culture contenant du PBS pour créer une chambre d’hydratation. Incuber la plaque dans des conditions appropriées.

L’humidité du PBS empêche l’évaporation du média des gouttes suspendues. Rafraîchissez les gouttes en remplaçant quelques microlitres de média. En raison de la tension superficielle, les gouttelettes conservent leur forme sphérique et restent suspendues à la surface intérieure de la plaque. Les forces gravitationnelles permettent aux cellules de rester en suspension sans se propager, mais s’agrègent pour former des sphéroïdes tridimensionnels dans les gouttelettes. Enfin, rincez les gouttelettes avec du PBS pour récol