Modèle expérimental de mélanome métastatique : une plateforme pour étudier le potentiel métastatique des cellules de mélanome dans les poumons

0 vues3:52 min • April 30th, 2023

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- Des modèles expérimentaux de métastases permettent d’évaluer le potentiel des cellules tumorales à extravaser et à proliférer dans des sites particuliers après une injection intravasculaire. Pour commencer, préparez une suspension unicellulaire de cellules de mélanome à la concentration souhaitée à l’aide d’un milieu approprié. Chargez la suspension dans une seringue.

Ensuite, retenez une souris dans une chambre et fixez-la de manière à ce que sa queue soit accessible. Faites pivoter la souris de 90 degrés pour visualiser sa veine latérale. Utilisez une lampe chauffante pour augmenter la température ambiante afin de dilater la veine de la queue. Maintenant, insérez l’aiguille vers l’extrémité distale de la queue et injectez la suspension de cellules de mélanome préparée dans la veine dilatée.

Les cellules tumorales métastatiques injectées migrent dans le système circulatoire. Finalement, certaines de ces cellules extravasent de la circulation vers des organes éloignés comme les poumons. Ces cellules tumorales s’adaptent à leur nouveau microenvironnement pour proliférer et établir des foyers métastatiques expérimentaux.

Dans le protocole suivant, nous démontrerons l’injection dans la veine caudale de cellules de mélanome B16-BL6 dans un modèle murin pour étudier leur potentiel métastatique.

- Une fois que toutes les suspensions de cellules B16-BL6 ont été préparées, sélectionnez une souris. En le tenant par la queue, guidez l’animal, par l’arrière en premier, dans un dispositif de contention. Lorsque le torse de la souris est dans la chambre principale et sa queue à l'extérieur de l'appareil, tirez l'animal vers l'extrémité du dispositif de contention.

Ensuite, insérez le piston de retenue et continuez à pousser sur le piston jusqu’à ce que la souris soit bien fixée. Une fois l’animal en place, faites pivoter la souris de 90 degrés de sorte que l’une des veines latérales de la queue soit tournée vers le haut. Ensuite, utilisez un tampon imbibé d'alcool pour nettoyer vigoureusement le côté de la queue de la souris où la veine est la plus visible.

Pour préparer l’injection, prélevez d’abord 300 microlitres de la suspension de 0,5 million de cellules par millilitre dans une seringue. Ensuite, éjectez les bulles de la seringue en la renversant, en effleurant son côté et en poussant le piston. Une fois les bulles éliminées, éjectez la culture cellulaire pour obtenir un volume final de 250 microlitres dans la seringue.

Procédez à l’extension de la queue de la souris avec la main non dominante. Tenez-le de manière à ce que l’index élève l’extrémité proximale de la queue et que le pouce enfonce la partie distale. Avec la main dominante, insérez l’aiguille dans la veine vers l’extrémité distale de la queue, à un angle minuscule vers le bas. Ensuite, insérez davantage l’aiguille en l’ajustant de manière à ce qu’elle corresponde à l’angle de la veine de la queue.

Une fois l’aiguille insérée, à environ 1 centimètre dans la veine de la queue, commencez à pousser le piston tout en maintenant la seringue stable. Arrêtez tout saignement en tenant de la gaze contre le site d’entrée. Une fois la suspension cellulaire éjectée, retirez l’aiguille de la veine et jetez-la. Ensuite, retirez le piston de la retenue et placez la souris dans une cage réceptrice.

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Dernière mise à jour : 22 août 2026